9楼: Originally posted by yanhui8558 at 2011-07-18 11:29:55
要活性的，且老师不想做变复性

14楼: Originally posted by soopyfu at 2014-03-27 10:50:55
问题解决了吗 我遇到了同样的问题...

13楼: Originally posted by Suzhipeng at 2013-07-31 12:32:53
为什用PBS做镍柱平衡液呢？你破菌用的Buffer是PBS吗？
我一直在做His 标签的蛋白纯化,上清表达的蛋白在lysis,equilibrium,Binding所用的buffer是一样的都是含有10mM或20mM的咪唑buffer.

4楼: Originally posted by ybs007 at 2011-07-14 10:27:08
很有可能是你融合的蛋白改变了构象，将6His包裹起来不能与镍柱亲和。由于你用的是pET-21a，貌似只有C端的6His，所以要么更换载体，或者更换其他的纯化标签，比如T7标签。

2楼: Originally posted by zx1984 at 2011-07-11 19:13:05
我用pet28a载体表达蛋白，也用超声破碎和和先溶菌酶处理后超声处理破碎，和你一样的情况，也是不挂镍柱。后来用wash buffer浓度梯度洗也不好。很郁闷。