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yanhui8558金虫 (小有名气)
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[求助]
his标签蛋白纯化，不挂柱 已有1人参与
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我一直在用大肠杆菌表达一个蛋白激酶，用pet21a载体，用过超声破碎和先溶菌酶处理和超声处理破碎。结果蛋白主要在沉淀中，上清中的量不多但还可以，主要问题是不怎么挂镍柱，用PBS平衡柱子，PH8.0, 30mM咪唑洗杂蛋白，250mM咪唑洗脱，跑蛋白电泳和western都是穿过液和上清条带都差不多，很苦恼， 有没有高人指点一下啊。 |
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