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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MTT跟流式结果相反
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homebole12

铜虫 (初入文坛)

[求助] MTT跟流式结果相反

MTT实验表明在某个浓度范围内没有明显的细胞毒性，但是流式PI染色，发现在这个浓度范围内能够有效阻滞细胞周期，并且诱导细胞凋亡。所有实验都重复了3次，结果都一样。请问是什么原因？谢谢！
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1楼 2011-07-10 20:51:24
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天(金币+3): 鼓励回答 2011-07-19 22:55:52
homebole12(金币+3): 哦哦，大概明白了，也就是凋亡了的细胞仍然可能短时间存在还原性辅酶。不过我都已经培育48小时了，按理应该不存在了。谢谢啊~~ 2011-07-20 12:02:45
MTT原理是线粒体中的还原性辅酶将MTT还原成不溶性的甲囋颗粒，然后加入DMSO溶解测定吸光值，流式显示细胞周期阻和凋亡，并不等于细胞中不存在还原性辅酶，还有就是流式要比MTT敏感性强很多，你试试将培养时间延长，看看MTT结果如何？
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4楼2011-07-19 20:43:56
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
homebole12(金币+2): 我明白MTT的重复性不好，但不应该会跟流式有明显的结果差别。谢谢。 2011-07-16 21:36:11
lstt09nk(金币+1): 感谢交流，欢迎常来 2011-07-17 20:17:46
MTT 实验重复行不是很好 跟你接种的细胞密度 培养时间 血清浓度都有很大的关系
我最近也在做 结果也不是很理想
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2楼2011-07-16 09:42:35
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homebole12

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 子曰包子好吃 at 2011-07-16 09:42:35:
MTT 实验重复行不是很好 跟你接种的细胞密度 培养时间 血清浓度都有很大的关系
我最近也在做 结果也不是很理想

MTT重复性不好，但至少在某个范围内的有无细胞毒性这个结果不会变的。但现在问题是我加入200uM的药物都没显示明显的细胞毒性，但是流式，我加入20uM的药物，已经有非常明显的细胞周期阻滞跟凋亡峰出现。
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3楼2011-07-16 21:34:17
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geek23

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-07-21 09:40:54
同意楼上.首先流式是单细胞检测,灵敏度要教MTT高.另外你的药物主要是导G1-S 还是G2-M 个人认为周期阻滞不会立即引起细胞死亡 可能还是一个时间过程的问题.还有就是MTT对于上药浓度 细胞密度的准确性 都比较严格.我做实验时也是,有时细胞铺不匀就会出现奇怪的结果.
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Bethechangeyouwishtosee.
5楼2011-07-20 21:09:39
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