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xubuoshi

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光蛋白酶的制备方法

我想标记酶,
文献上的方法是这样的
1。将40mg的漆酶加入到1mlpbs中,再加入1.5mlCBS(碳酸盐缓冲液)
2.在另一只试管中加入一定量的FITC(荧光标记物)分散到0.3ml的CBS中
3.迅速将2步中的FITC加入到1步中的漆酶溶液中,
4.室温搅拌2h,再离心15min
5.用葡聚糖凝胶G-15洗去上层的悬浊液
6.得到FITC标记的漆酶,收集到3个试管中,于-20度保存
但是遇到3个问题就是:
2步中FITC一般对应于酶(不是抗体)的用量是多少
5步中一般情况FITC的来标记酶的时候要用到葡聚糖凝胶洗去酶上方的悬浮液,这是个大问题,具体怎样操作使用葡聚糖凝胶洗呢,网上的太多,不知道选取哪种,有做过的,给常用简单易行呗?十分感谢,在这里作揖了。
6步中的收集,到底什么时间收集的出来的是需要的蛋白质呢。
ps:这个凝聚糖凝胶到底要用什么泡,泡多久,有的是6h,有的是24h,到底听那个?
期待您的回复

[ Last edited by xubuoshi on 2011-7-6 at 16:06 ]
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tyhjqxbz

主管区长 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

如果你的这些问题文献上都有的话也不用你做实验了,就是因为没有你要去做试探性的实验,去判断反应量和反应时间在什么值的情况下是最佳的!这些都是实验的影响因素,你只有通过实验才能判断的!
只为成功找方法,不为失败找借口——欢迎常到注册执考区
3楼2011-07-09 09:28:57
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xubuoshi

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
自己赠自己多花吧,怪不容易的
2楼2011-07-07 11:09:40
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xubuoshi

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by tyhjqxbz at 2011-07-09 09:28:57:
如果你的这些问题文献上都有的话也不用你做实验了,就是因为没有你要去做试探性的实验,去判断反应量和反应时间在什么值的情况下是最佳的!这些都是实验的影响因素,你只有通过实验才能判断的!

恩,我试了。自己摸索吧
4楼2011-07-09 14:35:31
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