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erryzhen

禁虫 (小有名气)

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


西瓜(金币+1): 最常用的啦 2011-07-02 17:47:15
就用T4 Ligase。
2楼2011-07-01 16:00:58
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
Promega 的T4 DNA ligase
3楼2011-07-01 16:23:59
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chasetju

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by erryzhen at 2011-07-01 14:42:10:
最近一直在做连接,用了好几个连接酶都没连上。跟大家交流交流!

感觉NEB的连接酶最好用。
4楼2011-07-01 16:51:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 经验啊! 2011-07-01 18:04:52
我们用TAKARA的T4 DNA ligase,连接没有什么问题呀。。。

其实楼主,我想说的是你用了好几种连接酶都没有连接上,那大部分可能性应该就是你载体和基因的问题了,跟酶的关系应该不大。
首先:
1:你的载体酶切的是否干净?如果酶切不完全,那么很影响连接的;
2:还有你的基因酶切的情况呢?
3:连接体系以及感受态细胞效率如何?
4:筛选标记等等。。。。
虽然做一个连接看似简单,实则并不是那么回事的。。。
所以每一步都找找问题,相信最终问题总会解决的。。。
祝好运!

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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-07-01 17:13:53
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erryzhen

禁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
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6楼2011-07-02 16:21:29
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-07-02 17:48:04
酶切之后连接是用宝生物TAKARA的T4 DNA  ligase,还有他们家的连接试剂盒,那个也很好用。PCR P的片段的话 是用PMD18-T和 Solution1连接吧,16度过夜,连接时间可以长一些。
生命即这般无尽变数,辗转来去皆苛求不得
7楼2011-07-02 16:48:03
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erryzhen

禁虫 (小有名气)

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8楼2011-07-05 08:31:38
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更深的蓝

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
觉得克隆靠经验和人品。
低调务实!
9楼2011-07-05 08:50:24
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yyue0819

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
连接酶,首选,当然是T4了,用的最多...
10楼2011-07-05 09:03:29
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