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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家都用什么连接酶啊？
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erryzhen

禁虫 (小有名气)
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-07-01 14:42:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
西瓜(金币+1): 最常用的啦 2011-07-02 17:47:15
就用T4 Ligase。
回复此楼
2楼2011-07-01 16:00:58
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
Promega 的T4 DNA ligase
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3楼2011-07-01 16:23:59
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chasetju

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by erryzhen at 2011-07-01 14:42:10:
最近一直在做连接，用了好几个连接酶都没连上。跟大家交流交流！

感觉NEB的连接酶最好用。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-01 16:51:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 经验啊！ 2011-07-01 18:04:52
我们用TAKARA的T4 DNA ligase，连接没有什么问题呀。。。

其实楼主，我想说的是你用了好几种连接酶都没有连接上，那大部分可能性应该就是你载体和基因的问题了，跟酶的关系应该不大。
首先：
1：你的载体酶切的是否干净？如果酶切不完全，那么很影响连接的；
2：还有你的基因酶切的情况呢？
3：连接体系以及感受态细胞效率如何？
4：筛选标记等等。。。。
虽然做一个连接看似简单，实则并不是那么回事的。。。
所以每一步都找找问题，相信最终问题总会解决的。。。
祝好运！
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

erryzhen
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-07-01 17:13:53
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erryzhen

禁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
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6楼2011-07-02 16:21:29
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-07-02 17:48:04
酶切之后连接是用宝生物TAKARA的T4 DNA  ligase，还有他们家的连接试剂盒，那个也很好用。PCR P的片段的话 是用PMD18-T和 Solution1连接吧，16度过夜，连接时间可以长一些。
赞一下(2人) 回复此楼
生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
7楼2011-07-02 16:48:03
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erryzhen

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2011-07-05 08:31:38
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
觉得克隆靠经验和人品。
赞一下(1人) 回复此楼
低调务实！
9楼2011-07-05 08:50:24
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yyue0819

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
连接酶，首选，当然是T4了，用的最多...
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-07-05 09:03:29
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