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namezlb银虫 (小有名气)
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[求助]
请问大家怎么鉴定融合子
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两个不同菌种的链霉菌进行基因组重排（即原生质体融合），得到所谓的融合子后，请问各位高手，在分子水平上如何鉴定这个菌株是不是真正的融合子？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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gwbk
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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namezlb(金币+5): 2011-07-01 18:19:41
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-07-01 19:27:21
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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-07-01 19:27:21
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1、核染色 将融合子接种至完全培养基中30℃培养5-6h后，用姬姆萨染液进行核染色。融合子的核为单核细胞。 2、亲本及融合子DNA含量的测定 (1)抽提DNA。 (2)检测DNA的纯度：把抽提获得的DNA进行分光光度计测定，分别测定其OD260nm 与OD280nm 的光吸收值。把OD260nm 与OD280nm 的比值大于等于1.8定为DNA纯度合格或者说其中的蛋白质含量符合要求。 (3)DNA含量的计算：可从OD260nm 值换算出DNA的含量(μg/ mL)。再根据检测出的活菌数(个/mL )，便可推算出每个菌体细胞中平均含有的DNA量(μg DNA/每个菌体)。 (4)融合子的DNA：融合子菌株的DNA含量等于供试亲本菌株DNA含量之和。 3、蛋白图是双亲的图谱的总和。 |
2楼2011-07-01 15:50:08