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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 两步PCR 已有2人参与

最近发现两步PCR可以提高引物的特异性，之前用正常的PCR总是会出现非特异性，提高退火温度也不管用，所以，如果在进行PCR扩增时想提高引物特异性的虫友们，不妨试一试两步PCR扩增法（退火和延伸一起进行），但是前提是扩增的片段要短一点，我的目的片段是500bp。
现在把我的扩增程序写下来，仅供参考，希望可以帮助大家：
98℃，2min;
97℃ 15S，69℃ 1min，25个循环；
72℃，10min。

只是我不清楚为什么两步PCR可以提高特异性，如果哪位虫友知道，可以和大家分享一下，谢谢咯~

[ Last edited by wangdandelia on 2011-6-29 at 09:48 ]
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1楼 2011-06-29 09:47:55
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这个做RT时也是两步法，同求
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微生物发酵
2楼2011-06-29 10:28:44
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lahsxl

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你这是两步PCR吗？这好似而温度法又好像不是吧？不是很懂，希望懂得同仁们帮忙给解释一下
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-07-01 22:41:16
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