| 查看: 5546 | 回复: 105 | |||||
| 【奖励】 本帖被评价97次，作者lwjxz增加金币 73.8 个 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[资源]
现代药理学实验方法与技术简介
|
|||||
|
分子生物技术在药理学实验中应用较为广泛，包括核酸分子探针的标记、核酸分子杂交、多聚酶链反应、蛋白印迹杂交技术、cDNA文库、随机分子库技术、外核基因在真核细胞中的表达、转基因动物、人类基因治疗等。现将更为常用的技术介绍如下： 一、核酸分子探针的标记 标记核酸分子探针（nucleic acid probe）是进行核杂交的基础，根据核酸分子探针的来源及性质进行选择，选择的基本原则是具有高度的特异性，探针选择直接影响杂交结果的分析。根据检测对象和目的不同，，可选择不同的探针种类及标记方法。 ㈠ 探针种类 1．基因组DNA探针 是克隆化的各种基因片断，也是最常用的核酸探针，探针应尽可能选用基因编码（外显子），避免使用内含子及其它非编码序列。 2．cDNA探针 与mRNA互补的DNA链称cDNA，是一种较为理想的核酸探针，特异性较高。 3．RNA探针 RNA与RNA或DNA杂交体的探针稳定性，特异性高。 4．寡核苷酸探针 人工合成寡核苷酸片段做探针，可根据需要合成相应序列。 ㈡ 标记物 常用的探针标记物有两类：放射性同位素和非放射性同位素。标记物的检测具有高度灵敏性和特异性。标记和探针结合不影响杂交的特异性和稳定性。其中放射性同位素是应用最多的探针标记物，但易造成放射性污染，多数同位素的半衰期短，不能长期存放。常用的放射性同位素有32P¸3P¸35S，有时也用14C,125I或131I。 二、核酸分子杂交（nucleic acid hybridiazation ） 是指具有一定同源序列的两条核酸单链在一定的条件下，按碱基互补配对原则形成异质双链的过程。核酸分子杂交是分子生物学领域应用最广泛的技术，灵敏度高、特异性强，主要用于特异DNA或RNA的定性定量检测。 三、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外酶促扩增特异DNA片段的方法。传统的DNA扩增法是分子克隆法，需经过DNA酶切、链接、转化等步骤构建含有目的基因的载体。然后导入细胞中进行扩增，再用同位素标记的探针进行筛选，操作复杂，耗时。PCR技术灵敏度高，特异性强，操作简便。PCR是本世纪分子生物学研究领域中最重要的发明之一。 四、cDNA文库 是指以mRNA为模板，在反转录酶的作用下形成的互补 DNA（complementary DNA,cDNA）。cDNA文库是指一群含重组DNA细菌或嗜菌体克隆。每一个克隆只含一种mRNA的信息，足够数目克隆的总和则含细胞的全部mRNA信息，此种克隆群体叫cDNA文库。 五．随机分子库技术（random moleculer library） 采用不同技术手段和在不同的分子水平有效地实现分子的多样性。其技术路线，一是利用化学合成的方法生成已知结构的化合物，以某种特定方式和一定规律组合在一起，只要确定某一化合物具有活性，即可根据建库的组合方式确定其结构，围绕此技术发展的随机分子库总称为化学合成库（synthetic chemical library）。二是利用基因工程方法直接合成的DNA或RNA的核酸库（nucleic acid library ）,由DNA随即编码表达的小分子和大分子的混合群体而表达物的表面显露又提供了可从庞大的复杂的群体中快速筛选到目的物，这就是近几年发展起来的极富有应用潜力的核酸编码分子肽库（oligonucleotide-encoded peptide library ）。 六．真核基因的表达调控技术 真核细胞具有比原核细胞更为庞大的和复杂的基因组。高等真核细胞基因组编码成千上万个基因，基因内遗传信息从DNA到蛋白质的传递过程，即基因表达过程受不同层次调节机制精密调控，此调控既决定着基因表达的量，又决定基因表达的时空顺序。调控过程精密复杂，涉及到转录前染色质的活化；转录水平的调节；转录后的加工；翻译水平的调节及翻译后的修饰等。基因表达的调控主要发生在转录水平。 七．转基因动物 是用实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。此种方法可建立转基因动物模型，以研究外源基因在整体动物中的表达调控率；能改变动物基因使其表现更符合人类需要；也可用转基因动物产生人类所需要的生物活性物质。 ～～～～～～ ～～～～～～ 下载：http://ishare.iask.sina.com.cn/f/16503830.html |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 万卷阁 | 玉冰灵载集 | 收藏 |
» 猜你喜欢
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有22人回复
-
时间戳又变了
已经有14人回复
-
科研孤儿太难了
已经有4人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有10人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有16人回复
-
重要消息，中午系统在维护
已经有12人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有20人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有21人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有15人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 药理学实验指导
已经有27人回复
- 【分享】聚合酶链反应（PCR)技术 动画
已经有123人回复
- 分子生物学常用实验技术
已经有277人回复
- 请问原核细菌蛋白能否在真核细胞中表达？
已经有8人回复
- 目的基因的导入
已经有19人回复
- [文书写作培训资料]现代企业文书写作【转载】
已经有5人回复
- 14C同位素实验
已经有6人回复
- 现代分子生物学实验技术
已经有324人回复
- 生态学野外调查方法与数据处理简介.pdf
已经有223人回复
- 现代植物生理学实验指南（中国科学院上海植物生理研究所 上海市植物生理学会 编）
已经有185人回复
- 【求助】一个非常简单的药理学实验
已经有7人回复
- 【交流】哪本实验药理学书好
已经有3人回复
4楼2011-06-30 12:19:42
简单回复
小鹿撞心头2楼
2011-06-27 15:13
回复
五星好评 感谢分享！
2011-06-28 16:29
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
文初5楼
2011-06-30 13:24
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
盖人荣6楼
2011-07-14 22:43
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
张月芬7楼
2011-07-15 10:36
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
zyy45818楼
2011-07-16 08:36
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
2011-07-24 18:29
回复
三星好评 顶一下，感谢分享！
ssvke11楼
2011-09-07 13:21
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
kiloqk12楼
2011-09-29 10:21
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
li_xd200513楼
2011-09-29 11:20
回复
三星好评 顶一下，感谢分享！
笨虫也有梦想14楼
2011-10-11 11:47
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
40