| 查看: 4641 | 回复: 52 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
yoyoyoyo3985金虫 (小有名气)
|
[交流]
双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点 已有25人参与
|
||
|
我现在在做一个基因的昆虫表达，表达载体是用的是pFast HT A（载体有4850bp）。我的基因目前上到了PMD18-T的载体上，带酶切位点，已经测序验证了，基因和酶切位点及保护碱基都是完整正确的，内切酶用得是Hind III 和Spe I 酶切回收的片段和载体质量都还不错，条带明亮单一，浓度约为50ng/ul 反复做了好多次，T4连接酶过夜连接 做转化，都是不长斑。 隐形对照加的酶切后的空载体，阳性对照用得是未酶切的载体，结果也没问题。 T4连接酶买的新的，感受态也是新的。 那么我的问题到底出在哪里呢？ 求高手指点。非常感谢，现在做的都快吐了…… |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有136人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
weekend883
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1117
- 散金: 100
- 帖子: 130
- 在线: 78.1小时
- 虫号: 493325
- 注册: 2008-01-10
- 专业: 微生物遗传育种学
35楼2012-12-05 12:33:28
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16348.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2011-06-22 10:06:56
yoyoyoyo3985
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 625
- 散金: 60
- 红花: 1
- 帖子: 154
- 在线: 64.2小时
- 虫号: 600281
- 注册: 2008-09-12
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2011-06-22 10:13:03
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-22 16:51:41
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-22 16:51:41
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2011-06-22 10:21:34
