| 查看: 1082 | 回复: 7 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
complement experiment 相关问题
|
||||
|
我想做complement experiment，现在已经得到重组质粒，将临床分离的突变菌株做成感受态，用化学转化的方法。 但是我的菌株本来就有很高的耐药性，将PGEM-T Easy（amp 抗性）和目的基因的重组质粒转进去后没办法筛选。 我尝试用蓝白筛选，稀释很多倍，但是得到的全是蓝色的菌台，都连在一起，根本没有单菌落，再进一步稀释怕把仅有的但菌落遗漏，导致现在是否转化成功都不清楚 请高手指点，谢谢 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有125人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助几个理论问题
已经有53人回复
- 工程技术性的论文投稿会不会牵涉到政治性敏感问题
已经有13人回复
- 做液质联用时，用质谱作为检测器相关问题，谢谢了。。
已经有8人回复
- 【求助】医药公司（卖药）异地建仓库的GSP认证相关问题
已经有6人回复
- 请问访学计划的相关问题
已经有5人回复
- 浙大药学院考博相关问题，请大侠们赐教
已经有6人回复
- 关于注射剂无菌检查和验证时冲洗量和冲洗次数相关问题。
已经有18人回复
- 用硝酸和高氯酸消化食品中铅相关问题，谢谢！
已经有9人回复
- 【资源】Theory and Experiment in Electrocatalysis
已经有5人回复
- 【分享】蛋白质结构预测流程
已经有32人回复
- 【求助】关于锂电池阴极阳极正极负极的相关问题
已经有12人回复
7楼2011-06-22 21:54:15
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16334.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3653
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 耐药性可以作为快速筛选的方法，楼下说的有道理。 2011-06-22 15:18:26
西瓜: 考核存档 2011-06-22 15:20:04
475502411(金币+8): 2011-06-22 15:53:05
475502411(金币+4): 2011-07-04 22:13:14
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 耐药性可以作为快速筛选的方法，楼下说的有道理。 2011-06-22 15:18:26
西瓜: 考核存档 2011-06-22 15:20:04
475502411(金币+8): 2011-06-22 15:53:05
475502411(金币+4): 2011-07-04 22:13:14
|
1：首先确定你的重组载体没有什么问题，如果有问题，那么就不能继续往下进行实验了； 2：做互补实验跟你的菌株耐药性没有什么关系。。。你将重组载体转化进去，为什么还要进行蓝白斑筛选呢？蓝白筛选理应在你验证是否连接上的时候才要进行的吧？一般如果你将目的基因成功连接至载体上的时候，做互补只需要将重组载体转化至突变体中，看看表型有没有回复至野生型就可以了，当然了，转化后你只需要提取质粒验证就可以了； 3：顺便说说对照怎么做吧，首先1号：PGEM-T Easy空载体转化进野生型； 2号：PGEM-T Easy空载体转化进突变体菌株； 3号：重组载体转化进突变株； 4号：重组载体转化进野生型（当然这个可能是多余，但是如果做互补的话，顺便带一个这个，看看你这个基因过量表达的话对菌的表型有什么影响未尝不可呢？有些基因确实是补不回去，可是过表达它就会有意想不到的表型的）； 4：其实做互补就是将目的基因连接至一个过量表达的载体上然后转化进突变株中，看看表型可以恢复不？过表达的载体很多，PJN105 PUC系列等等。。。 祝好运！  |
2楼2011-06-22 10:03:14
yuxia82012
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4980
- 散金: 2225
- 红花: 2
- 帖子: 1340
- 在线: 426.5小时
- 虫号: 781881
- 注册: 2009-05-29
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
3楼2011-06-22 12:06:37
4楼2011-06-22 15:59:35
