应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » complement experiment 相关问题
51/1返回列表
查看: 1430  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] complement experiment 相关问题

我想做complement experiment，现在已经得到重组质粒，将临床分离的突变菌株做成感受态，用化学转化的方法。
但是我的菌株本来就有很高的耐药性，将PGEM-T Easy（amp 抗性）和目的基因的重组质粒转进去后没办法筛选。
我尝试用蓝白筛选，稀释很多倍，但是得到的全是蓝色的菌台，都连在一起，根本没有单菌落，再进一步稀释怕把仅有的但菌落遗漏，导致现在是否转化成功都不清楚
请高手指点，谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
1楼 2011-06-22 09:26:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
西瓜: 可以补充到1楼。 2011-06-22 21:45:42
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-06-22 12:06:37:
你说的耐药性本身就是抗氨苄青霉素的吗？这样子的话最好另外寻找带合适抗性的载体来做，蓝白斑本身也不是那么灵敏

是的，并且MIC达到512，这株菌是临床突变菌株，各类药物的耐药水平都很高，帮忙看看吧，各药物的MIC在附件
赞一下(1人) 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
5楼2011-06-22 16:16:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 耐药性可以作为快速筛选的方法，楼下说的有道理。 2011-06-22 15:18:26
西瓜: 考核存档 2011-06-22 15:20:04
475502411(金币+8): 2011-06-22 15:53:05
475502411(金币+4): 2011-07-04 22:13:14
1：首先确定你的重组载体没有什么问题，如果有问题，那么就不能继续往下进行实验了；
2：做互补实验跟你的菌株耐药性没有什么关系。。。你将重组载体转化进去，为什么还要进行蓝白斑筛选呢？蓝白筛选理应在你验证是否连接上的时候才要进行的吧？一般如果你将目的基因成功连接至载体上的时候，做互补只需要将重组载体转化至突变体中，看看表型有没有回复至野生型就可以了，当然了，转化后你只需要提取质粒验证就可以了；
3：顺便说说对照怎么做吧，首先1号：PGEM-T Easy空载体转化进野生型；
                             2号：PGEM-T Easy空载体转化进突变体菌株；
                             3号：重组载体转化进突变株；
                             4号：重组载体转化进野生型（当然这个可能是多余，但是如果做互补的话，顺便带一个这个，看看你这个基因过量表达的话对菌的表型有什么影响未尝不可呢？有些基因确实是补不回去，可是过表达它就会有意想不到的表型的）；

4：其实做互补就是将目的基因连接至一个过量表达的载体上然后转化进突变株中，看看表型可以恢复不？过表达的载体很多，PJN105 PUC系列等等。。。

祝好运！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-06-22 10:03:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Amp就是氨苄青霉素（ampicillin）啦。我也觉得应该换别种抗性的载体。 2011-06-22 15:19:52
475502411(金币+1): 2011-06-22 15:52:56
475502411(金币+2): 2011-07-04 22:13:06
你说的耐药性本身就是抗氨苄青霉素的吗？这样子的话最好另外寻找带合适抗性的载体来做，蓝白斑本身也不是那么灵敏
赞一下(1人) 回复此楼
在等待中涅槃重生
3楼2011-06-22 12:06:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-22 10:03:14:
1：首先确定你的重组载体没有什么问题，如果有问题，那么就不能继续往下进行实验了；
2：做互补实验跟你的菌株耐药性没有什么关系。。。你将重组载体转化进去，为什么还要进行蓝白斑筛选呢？蓝白筛选理应在你验证 ...

谢谢！真的好厉害啊！
我现在已经连接成功
但往突变菌株中转化后不知道怎么筛选，因为我的突变菌株的耐药性很高，对氨苄和卡那的MIC都达到了512，我用蓝白筛选是为了 检测转化子，因为用要搬筛选已经行不通了
目前的困惑在于用蓝白筛选时，转化子较少，细胞浓度大，导致整个板上没单菌落，并且全是蓝色
苦脑，求助
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
4楼2011-06-22 15:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:26 by Z9YWQ5EAO3qp
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:14 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 13:35 by C3vABopYbZJS
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭