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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化后的蛋白做western，出现很明显的两条带，请问是二聚体吗？怎么打开成单体？
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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2011-06-19 21:22:30
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DL_nvwu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pdspjl126 at 2011-07-11 11:37:04
我查了一下 我的蛋白分子量是22.5KDa ，有四个半胱氨酸  文献说它的活性状态是可溶性的二聚体。我的蛋白是以包涵体的形式存在的，我用6M尿素溶解包涵体后又进行梯度透析使其复性，然后才上柱纯化的，纯化结果有单体 ...

楼主，为什么复性后要再纯化呢
赞一下 回复此楼
欢迎学术交流，共同进步
12楼2017-04-09 11:00:39
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 19:51:54
loading buffer中加SDS，DTT，沸水浴5min，12000rpm离心2min后上清上样试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-20 19:34:20
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！很犀利的新虫，潜力啊，哈哈~ 2011-06-21 08:52:53
pdspjl126(金币+5): 2011-07-11 11:29:58
1、分析一下序列，看看有多少个半胱氨酸，看是否存在形成二聚体的可能。
2、如果只是想在跑胶的时候把二聚体打开，那应该不难，巯基乙醇或者DDT等还原剂应该都能做到；
3、但是想在过柱的时候始终保持单体状态就不那么容易了，恐怕要试多一些的条件，缓冲液、离子浓度、适当的还原剂等等；
4、或者过柱时在洗脱样品的时候，分小管收集，因为单体和二聚体的性质差别，有可能在洗脱的时候出来的先后顺序不同。
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pdspjl126
3楼2011-06-20 20:53:13
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
半胱氨酸容易导致蛋白形成二聚体吗？我不太懂，刚进入生物领域，请多指教，谢谢
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4楼2011-06-21 08:30:55
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