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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)

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DL_nvwu

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by pdspjl126 at 2011-07-11 11:37:04
我查了一下 我的蛋白分子量是22.5KDa ,有四个半胱氨酸  文献说它的活性状态是可溶性的二聚体。我的蛋白是以包涵体的形式存在的,我用6M尿素溶解包涵体后又进行梯度透析使其复性,然后才上柱纯化的,纯化结果有单体 ...

楼主,为什么复性后要再纯化呢
欢迎学术交流,共同进步
12楼2017-04-09 11:00:39
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 19:51:54
loading buffer中加SDS,DTT,沸水浴5min,12000rpm离心2min后上清上样试试
2楼2011-06-20 19:34:20
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good!很犀利的新虫,潜力啊,哈哈~ 2011-06-21 08:52:53
pdspjl126(金币+5): 2011-07-11 11:29:58
1、分析一下序列,看看有多少个半胱氨酸,看是否存在形成二聚体的可能。
2、如果只是想在跑胶的时候把二聚体打开,那应该不难,巯基乙醇或者DDT等还原剂应该都能做到;
3、但是想在过柱的时候始终保持单体状态就不那么容易了,恐怕要试多一些的条件,缓冲液、离子浓度、适当的还原剂等等;
4、或者过柱时在洗脱样品的时候,分小管收集,因为单体和二聚体的性质差别,有可能在洗脱的时候出来的先后顺序不同。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2011-06-20 20:53:13
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

半胱氨酸容易导致蛋白形成二聚体吗?我不太懂,刚进入生物领域,请多指教,谢谢
4楼2011-06-21 08:30:55
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