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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)

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low-key

铜虫 (初入文坛)

我的也是蛋白也是,活性蛋白为可溶性二聚体,大肠杆菌表达系统,表达出来的是单体,但是上NI柱纯化之后就会出现二聚体,这样的二聚体我尝试过去掉变性剂,之后可溶但是容易降解,同问,这样的二聚体可能具有活性吗??
11楼2015-07-14 00:08:10
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 19:51:54
loading buffer中加SDS,DTT,沸水浴5min,12000rpm离心2min后上清上样试试
2楼2011-06-20 19:34:20
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good!很犀利的新虫,潜力啊,哈哈~ 2011-06-21 08:52:53
pdspjl126(金币+5): 2011-07-11 11:29:58
1、分析一下序列,看看有多少个半胱氨酸,看是否存在形成二聚体的可能。
2、如果只是想在跑胶的时候把二聚体打开,那应该不难,巯基乙醇或者DDT等还原剂应该都能做到;
3、但是想在过柱的时候始终保持单体状态就不那么容易了,恐怕要试多一些的条件,缓冲液、离子浓度、适当的还原剂等等;
4、或者过柱时在洗脱样品的时候,分小管收集,因为单体和二聚体的性质差别,有可能在洗脱的时候出来的先后顺序不同。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2011-06-20 20:53:13
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

半胱氨酸容易导致蛋白形成二聚体吗?我不太懂,刚进入生物领域,请多指教,谢谢
4楼2011-06-21 08:30:55
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