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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化后的蛋白做western，出现很明显的两条带，请问是二聚体吗？怎么打开成单体？
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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2011-06-19 21:22:30
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low-key

铜虫 (初入文坛)
我的也是蛋白也是，活性蛋白为可溶性二聚体，大肠杆菌表达系统，表达出来的是单体，但是上NI柱纯化之后就会出现二聚体，这样的二聚体我尝试过去掉变性剂，之后可溶但是容易降解，同问，这样的二聚体可能具有活性吗？？
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11楼2015-07-14 00:08:10
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 19:51:54
loading buffer中加SDS，DTT，沸水浴5min，12000rpm离心2min后上清上样试试
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2楼2011-06-20 19:34:20
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！很犀利的新虫，潜力啊，哈哈~ 2011-06-21 08:52:53
pdspjl126(金币+5): 2011-07-11 11:29:58
1、分析一下序列，看看有多少个半胱氨酸，看是否存在形成二聚体的可能。
2、如果只是想在跑胶的时候把二聚体打开，那应该不难，巯基乙醇或者DDT等还原剂应该都能做到；
3、但是想在过柱的时候始终保持单体状态就不那么容易了，恐怕要试多一些的条件，缓冲液、离子浓度、适当的还原剂等等；
4、或者过柱时在洗脱样品的时候，分小管收集，因为单体和二聚体的性质差别，有可能在洗脱的时候出来的先后顺序不同。
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pdspjl126
3楼2011-06-20 20:53:13
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
半胱氨酸容易导致蛋白形成二聚体吗？我不太懂，刚进入生物领域，请多指教，谢谢
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4楼2011-06-21 08:30:55
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