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liuliancy

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 葡聚糖凝胶层析,流速过慢

大家都是怎么做葡聚糖凝胶层析的啊??我选用的G-100的葡聚糖凝胶,用蒸馏水煮沸2h溶胀后,装柱,自然沉降,结果流速很慢,大概5--6秒一滴,这个正常吗?凝胶是脱过气的,是不是我哪里操作有误?请高手指教!!!!
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zhh524491351

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-19 14:25:38
我觉得很慢,但是哪里出问题就不知道了,可能是填料有点堵。...

大侠你好。我想请问柱子堵了一般会是什么原因呢?粘度大?分子量大?我做的合成靶向淀粉纳米颗粒,文献都说纳米粒在与蛋白交联后要过柱子,以除去未能交联上的蛋白,可是淀粉的水溶性不是很好,分子量很大几十到几百千道尔顿的,会不会堵柱子?这两天准备做这一步了
16楼2016-01-13 21:37:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-06-18 22:15:40
liuliancy(金币+3): 非常感谢!!! 2011-06-19 09:00:59
内径和体积多大?一分钟多少流速?出水管大小不同,一滴的体积也不同,要测过不加压力的情况下,就是自然流过柱,要多久才能有1毫升,或者规范的说是一分钟多少毫升。我的内径1.6厘米,体积30毫升的自装柱,流速为0.8-1毫升每分钟。GE的预装柱一般推荐流速也差不多是1毫升每分钟,不会超过3的。除非是脱盐柱,50毫升的体积的,可以达到15毫升每分钟。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-06-18 20:17:49
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liuliancy

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-06-18 20:17:49:
内径和体积多大?一分钟多少流速?出水管大小不同,一滴的体积也不同,要测过不加压力的情况下,就是自然流过柱,要多久才能有1毫升,或者规范的说是一分钟多少毫升。我的内径1.6厘米,体积30毫升的自装柱,流速为 ...

内径1cm体积也是30ml,刚测了下,不加压一分钟大概0.5ml,正常吗??
3楼2011-06-18 20:52:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, EPI+1): 很好 2011-06-19 12:15:58
liuliancy(金币+2): 2011-06-20 09:53:09
稍微慢了点,凝胶柱填料也不是很刚性的,如果太重底部的凝胶会有点变形,流速就会慢一些。半径一厘米,那高就是不到40厘米,我怀疑高了一些。但是也可以做一次,因为一般一个半柱床体积之后就什么东西都出来了,照0.5毫升每分钟来算也只要一个半小时而已。高一些,分离得可能好一些。如果矮一些,分离效果可能会差一些,流速快一些也没有什么意义。先别有心理负担,做一次看效果如何。

我还觉得似乎两个小时用来溶胀稍微短了些,不过也无所谓了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-06-18 22:50:28
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