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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 葡聚糖凝胶层析，流速过慢
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liuliancy

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 葡聚糖凝胶层析，流速过慢

大家都是怎么做葡聚糖凝胶层析的啊？？我选用的G-100的葡聚糖凝胶，用蒸馏水煮沸2h溶胀后，装柱，自然沉降，结果流速很慢，大概5--6秒一滴，这个正常吗？凝胶是脱过气的，是不是我哪里操作有误？请高手指教！！！！
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1楼 2011-06-18 19:54:49
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zhh524491351

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-19 14:25:38
我觉得很慢，但是哪里出问题就不知道了，可能是填料有点堵。...

大侠你好。我想请问柱子堵了一般会是什么原因呢？粘度大？分子量大？我做的合成靶向淀粉纳米颗粒，文献都说纳米粒在与蛋白交联后要过柱子，以除去未能交联上的蛋白，可是淀粉的水溶性不是很好，分子量很大几十到几百千道尔顿的，会不会堵柱子？这两天准备做这一步了
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16楼2016-01-13 21:37:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！ 2011-06-18 22:15:40
liuliancy(金币+3): 非常感谢！！！ 2011-06-19 09:00:59
内径和体积多大？一分钟多少流速？出水管大小不同，一滴的体积也不同，要测过不加压力的情况下，就是自然流过柱，要多久才能有1毫升，或者规范的说是一分钟多少毫升。我的内径1.6厘米，体积30毫升的自装柱，流速为0.8-1毫升每分钟。GE的预装柱一般推荐流速也差不多是1毫升每分钟，不会超过3的。除非是脱盐柱，50毫升的体积的，可以达到15毫升每分钟。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-06-18 20:17:49
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liuliancy

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-06-18 20:17:49:
内径和体积多大？一分钟多少流速？出水管大小不同，一滴的体积也不同，要测过不加压力的情况下，就是自然流过柱，要多久才能有1毫升，或者规范的说是一分钟多少毫升。我的内径1.6厘米，体积30毫升的自装柱，流速为 ...

内径1cm体积也是30ml，刚测了下，不加压一分钟大概0.5ml，正常吗？？
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3楼2011-06-18 20:52:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, EPI+1): 很好 2011-06-19 12:15:58
liuliancy(金币+2): 2011-06-20 09:53:09
稍微慢了点，凝胶柱填料也不是很刚性的，如果太重底部的凝胶会有点变形，流速就会慢一些。半径一厘米，那高就是不到40厘米，我怀疑高了一些。但是也可以做一次，因为一般一个半柱床体积之后就什么东西都出来了，照0.5毫升每分钟来算也只要一个半小时而已。高一些，分离得可能好一些。如果矮一些，分离效果可能会差一些，流速快一些也没有什么意义。先别有心理负担，做一次看效果如何。

我还觉得似乎两个小时用来溶胀稍微短了些，不过也无所谓了。
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4楼2011-06-18 22:50:28
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