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亲和层析blue sepharose 6 Fast Flow 纯化羰基还原酶的问题
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以20mM 6.5 磷酸盐缓冲液平衡， 样品上样后，平衡液淋洗， 以5mM NAD+（溶于20mM 6.5 磷酸盐缓冲液）洗脱，出现一个很巨大的峰，但是其中没有酶活，也就是没有结合目的蛋白，而上样淋洗液里有酶活。 现在的问题是为什么会不结合，目的蛋白是与辅酶一结合的，检测酶活也是利用辅酶一的减少来进行的。 是pH的问题？pH对亲和的影响大么， 是上样量的问题？ 大家看呢 |
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