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da_da

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达

为什么要表达某个蛋白，要先把这个蛋白的基因连接到克隆载体上，再用PCR扩增，最后连到表达载体上，直接连接到表达载体上不行吗？新手，不太懂，希望懂的人帮解答下。谢谢！
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【分子生物】EPI帖

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心有多大，江湖就有多大！
1楼 2011-06-12 11:26:42
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刘怀

金虫 (正式写手)

品质工程师

【答案】应助回帖

西瓜: …… 2011-06-12 17:52:13
da_da(金币+1): 2011-06-15 10:08:24
基因的表达一般需要五个步：提取目的基因，导入基因载体，pcr扩增（就是基因的复制），复制的同时基因解旋，复制成信使RNA,信使RNA从细胞核中转移到细胞质间完成蛋白质的表达。
而你所说的表达载体即使信使RNA,而目的基因只有通过复制解旋才能转化为RNA,完成基因的表达。要想使目的基因表达首先待将目的基因导入能进行复制的细胞中，这就需要基因载体（此载体只能从微生物中提取，且再导入的细胞体内能独立存在，独立复制，不影响细胞的复制，能与细胞体和平相处）。基因载体与表达载体不是一回事。
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努力就有回报
4楼2011-06-12 12:20:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
da_da(金币+1): 2011-06-12 16:23:07
西瓜(金币+3): 赞成 2011-06-12 18:00:58
引用回帖:
Originally posted by da_da at 2011-06-12 11:26:42:
为什么要表达某个蛋白，要先把这个蛋白的基因连接到克隆载体上，再用PCR扩增，最后连到表达载体上，直接连接到表达载体上不行吗？新手，不太懂，希望懂的人帮解答下。谢谢！

你说的是一般流程，PCR后连接到克隆载体的目的测序和扩增。
也有一些不连克隆载体，直接连表达载体的。
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2楼2011-06-12 11:51:31
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101202139

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
da_da(金币+2): 2011-06-12 16:23:26
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-06-12 18:02:18
个人认为，顾名思义，克隆载体和表达载体的功能是不同，一个主要是克隆，另一个是表达。克隆载体对应的是克隆宿主菌，表达载体对应的是表达宿主菌。我们把目的基因克隆到克隆载体上是为了让目的基因大量克隆来验证目的基因是连接到克隆载体上了，而且提质粒的过程中，克隆宿主菌要比表达宿主菌相对效率较高，条带较亮。
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3楼2011-06-12 12:05:59
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gagalady

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
da_da(金币+2): 2011-06-12 16:23:44
西瓜(金币+3): 有道理啊 2011-06-12 18:02:03
连克隆载体有个用途是测序
测序是检测在目的带最初扩增的时候有没有变异，比如碱基的缺失 替换什么滴
生物公司的测序也是一种特殊的PCR，这种PCR也需要引物，所以T载体的引物就叫做公共引物。
楼主认为直接连接到表达载体也无不可，只需要在测序是提供适合该载体的测序引物即可。
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5楼2011-06-12 12:33:12
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