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yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白复性

各位有没有在做蛋白质复性的?讨教
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duckcat

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-06-09 23:22:13
yanfeier(金币+5): 2011-06-10 12:53:41
提供两个方法:
   1, denature蛋白用透析袋除去尿素或者盐酸胍,比较费时间!
   2,超滤柱离心除去变性剂!

如果以上两种方法都没有经验,我说一下我的方法(已成功)如果是PET原核表达系统,建议改变iptg诱导温度(如37度降到28度),有许多蛋白是可以表达在经过native裂解上清里面的(非包涵体的不变性),然后不加变性剂纯化就行了!

再补充一点,现在很多蛋白纯化试剂盒一开始的步骤都除去变性剂了,到最后回收的蛋白基本都是复性好的!

以上几点楼主择优选择吧!
2楼2011-06-09 21:26:44
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

补充一下,透析的时候最好用梯度透析先摸下条件,某则透析过度很容易让蛋白重新析出。。
摒气动方息,宁神心自明。
3楼2011-06-10 07:32:38
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