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xjlove

银虫 (小有名气)

[交流] 关于多糖的纯化问题

最近我想对粗糖进行纯化,我已经进行了脱蛋白、脱色素和透析,花了我一个星期的时间,昨天晚上好不容易可以去醇析了,我用的是95%的乙醇,然后放到冰箱里,可是今天早上来的时候,却发现一点沉淀都没有,为什么啊?
我是将6g粗多糖溶到400ml水中。95%的乙醇与多糖溶液比为1:1。

还有问题想问问:透析过程是不是得在低温下进行? 透析水是不是经常得进行更换?我一天晚上把装有多糖溶液的透析袋放到自来水中透析,可是到第二天中午去看的时候,透析袋内外都有白色的絮状悬浮物,这是什么东西啊?是不是有东西变质了啊?
粗多糖中的糖含量是很少的,醇析之后的沉淀可以很明显的观察到么?

我是新手,刚刚接触多糖,实验室又没得师兄师姐请教,正在郁闷中,请大家帮帮忙,指点指点,不然我这一个星期的工夫就白费了:(

十分感谢!

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yhyh96

木虫 (著名写手)



xjlove(金币+1):谢谢:)
一般乙醇与多糖溶液比为4:1,
透析过程是在常温下进行就可以了, 透析水一定常得进行更换,如果用自来水,最好保持水一直流动(就是不要关水龙头,一直用新鲜水)
白色的絮状悬浮物有是透析袋漏了,如果你一直没有换水,而且又是在夏天,可能多糖变了,不过你可以等干燥后再看看,以确正是否真的变了
2楼2006-10-09 10:32:51
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xjlove

银虫 (小有名气)

可是现在问题是醇析后根本就没有沉淀出来,浓缩后,到是有棕色的粘稠液出现,但是加水后,又有一些白色絮状的不溶于水的东东出现。干燥后,我怎么确定它是否变了呢?
3楼2006-10-09 10:49:32
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wxqdwf

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
xjlove(金币+2):非常感谢,在以后的实验中能够进一步得到您的指点:)
基本同意楼上的回答
沉淀多糖的乙醇浓度(指乙醇与多糖溶液混合以后的浓度)通常为75%左右(60~85%),不知你的粗多糖是否也是用1:1的比例沉淀出来的,如果是这样的话,那说明你的多糖在处理过程中发生了变性或是多糖浓度太低。
透析的基本要求是必须在低温下进行,通常还需搅拌以增强外围水的流动性,经常换水,最好用纯净一点的水。在实际操作过程中,通常采用楼上所说的变通的方法(即流动的自来水),但由此带来的结果就是用于自来水的不纯净,导致多糖变性及常温增加了染菌的可能。
多糖醇析后可以看到明显的白色沉淀或混浊。
以上是我三年多来做多糖的经验,希望对你有所帮助。
4楼2006-10-09 10:56:36
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wxqdwf

铁杆木虫 (正式写手)


killl(金币+1):感谢参与应助,欢迎多来求助板块帮助别人。
浓缩后有棕色的粘稠液出现,可能是你浓所的倍数太高,以及温度过高导致糖发生了反应而出现有色物质,加水后出现白色须状沉淀应该是加热变性以后德蛋白,说明你的多糖蛋白没有脱干净,确定是否变性需要走柱子看出峰情况确定
5楼2006-10-09 11:02:26
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xjlove

银虫 (小有名气)

那是否我得到的东西已经没什么意义了啊,那我一个星期的工夫都白费了啊:(
我能不能用薄层色谱简单鉴定一下多糖组分啊?

另外想请问一下:脱蛋白的时候,粗多糖一般需配成多少浓度的溶液合适啊?
我用30%的粗多糖6g,配了400ml的溶液,结果脱了近乎20次才脱净,这样太费时间和试剂了啊:(
6楼2006-10-09 11:32:13
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wxqdwf

铁杆木虫 (正式写手)

糖浓度没有特殊要求,脱蛋白就是比较费试剂和时间
7楼2006-10-09 15:03:47
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liuqin19842004

出现白色悬浮物,很可能是多糖自身的凝聚。本人也在做多糖的提取,遇到过同样的情况,找不到合适的解决办法,希望知道的人给我个答案!
8楼2007-08-02 12:02:04
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