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chunmeiyang银虫 (正式写手)
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[求助]
WB定量问题
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| 请问大家， WB是可以定量的吗 怎么定量啊？ |
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6楼2011-06-07 04:32:57
雪山飞狐7233
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【答案】应助回帖
chunmeiyang(金币+2): 2011-06-07 08:56:57
silicare: 谢谢，不过楼主的意思是WB定量，而不是蛋白定量方法 2011-06-07 18:23:56
silicare: 谢谢，不过楼主的意思是WB定量，而不是蛋白定量方法 2011-06-07 18:23:56
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蛋白含量的测定 （一） 制作标准曲线 1、从-20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。 2、取18个1.5ml离心管，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg ，10.0μg ，20.0μg ，40.0μg。 3、按下表在各管中加入各种试剂。 0μg 2.5μg 5.0μg 10.0μg 20.0μg 40.0μg 1mg/ml BSA － 2.5μl 5.0μl 10.0μl 20.0μl 40.0μl 0.15mol/L NaCl 100μl 97.5μl 95.0μl 90.0μl 80.0μl 60.0μl G250考马斯亮蓝溶液 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 4、混匀后，室温放置2min。在生物分光光度计上比色分析。 （二） 检测样品蛋白含量 1、取足量的1.5ml离心管，每管加入4℃储存的考马斯亮蓝溶液1ml。室温放置30min后即可用于测蛋白。 2、取一管考马斯亮蓝加0.15mol/L NaCl溶液100μl，混匀放置2分钟可做为空白样品，将空白倒入比色杯中在做好标准曲线的程序下按blank测空白样品。 3、弃空白样品，用无水乙醇清洗比色杯2次（每次0.5ml），再用无菌水洗一次。 4、取一管考马斯亮蓝加95μl 0.15mol/L NaCl NaCl溶液和5μl待测蛋白样品，混匀后静置2min，倒入扣干的比色杯中按sample键测样品。 注意：每测一个样品都要将比色杯用无水乙醇洗2次，无菌水洗一次。可同时混合好多个样品再一起测，这样对测定大量的蛋白样品可节省很多时间。测得的结果是5μl样品含的蛋白量。 100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA） BSA 0.1g 0.15 mol/L NaCl 1ml 溶解后-20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，-20℃保存。 我们得到标准曲线方程：y=0.02x+0.089(y代表OD600吸光值, x代表蛋白浓度ug/ul) 祝你好运！！这个方法还是很好用的。 |
2楼2011-06-06 17:10:01
雪山飞狐7233
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3楼2011-06-06 17:13:53
4楼2011-06-06 17:44:48
