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30937747

木虫 (小有名气)

[求助] [求助]高保真酶扩不出来

我提取RNA做反转录得到cDNA,以cDNA为模板做PCR,用普通taq酶扩出来的片段很亮,而且专一性很好,但是换高保真酶都扩不出来,换了两种酶,温度梯度和浓度梯度都做了,延伸的时间也增长了一倍.但是就是没有结果,请问有什么好的建议吗?
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我依旧会努力.
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hnsdly

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

30937747(金币+1): 都试过了.谢谢 2011-06-08 23:10:06
高保真的酶有时候的确不太容易扩增出目的片段。可以试试降低退火温度、加大酶量
5楼2011-06-08 12:57:50
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