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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] 大家评论下这个不伦不类的银染方法

银染法分为强碱法和弱碱法,我用师姐之前做过的方法,具体描述如下,大家评论下这个不伦不类的方法(既非强碱法亦非弱碱法啊,伤不起呀)

    电泳后采用银染的方法,银染[12]主要步骤:(1)去离子水洗脱3min;(2)10%乙酸固定10min;(3)去离子水洗脱2min;(4)银染15min(0.1%AgNO3);(5)去离子水洗脱0.5min;(6)显影液脱色6min(16gNaOH, 8ml37%甲醛溶液,用ddH2O定溶至1L);(7)10%乙酸固定1min;(8)去离子水洗脱,最后用相机或是在凝胶成像系统中拍照。

PS:顺便问下,甲醛的作用是什么?一般要加多少量?还有,弱碱法底色是浅,但会不会造成条带分辨率不是很好呢?

  小女子这厢谢过大家(*^__^*) 嘻嘻
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎应助。能否顺便回答下楼主顺便问的问题呢,嘿嘿 2011-06-03 18:31:39
墨池(金币+1): 2011-06-03 20:32:37
1.        固定液(乙醇 50 mL,冰醋酸2.5 mL)固定15 min
2.        Milli-Q纯水清洗,20 s和2 min各一次
3.        银染液(硝酸银1 g,37%甲醛0.75 mL)染色15 min
4.        Milli-Q纯水清洗,20 s和2 min各一次
5.        显色液(氢氧化钠7.5 g,37%甲醛2.5 mL)显色5-7 min
6.        最后用终止液(乙醇50 mL,冰醋酸2.5 mL)终止反应
3楼2011-06-03 13:58:22
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

墨池(金币+1): 2011-06-03 20:32:32
引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-06-03 13:58:22:
1.        固定液(乙醇 50 mL,冰醋酸2.5 mL)固定15 min
2.        Milli-Q纯水清洗,20 s和2 min各一次
3.        银染液(硝酸银1 g,37%甲醛0.75 mL)染色15 min
4.        Milli-Q纯水清洗,20 s和2 min各一次
5.        显色液(氢氧化钠7 ...

1.        用固定液(乙醇 50 mL,冰醋酸2.5 mL,定容500 mL)固定15 min
2.        Milli-Q纯水清洗,20 s和2 min各一次
3.        银染液(硝酸银1 g,37%甲醛0.75 mL,定容500 mL)染色15 min
4.        Milli-Q纯水清洗,20 s和2 min各一次
5.        显色液(氢氧化钠7.5 g,37%甲醛2.5 mL,定容500 mL)显色5-7 min
6.        最后用终止液(乙醇50 mL,冰醋酸2.5 mL,定容500 mL)终止反应
4楼2011-06-03 13:59:38
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