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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助PCR老是跑不出条带
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周梦怡

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-04 19:05:41
引用回帖:
Originally posted by 周梦怡 at 2011-06-04 13:05:51:
模板太多了 很可能那16S的刷子是来源你模板 我也碰到这情况 当时我是20加1 后来改为20加0.5 就出现带了
温度的话 建议你做个温度梯度 我用的温度是57度
还有 一定要确保你提的DNA够纯 不存在PCR抑制剂
:ha ...

还忘了说一句 全基因组DNA很长，如果在PCR体系中模板浓度高的话，不利于DNA的伸展，会严重影响PCR，所以PCR的时候DNA不宜多
还有在取DNA样的时候，可以把枪头剪掉点，原因是全基因组DNA很长，比较粘，枪头太细的话，会造成取样不准，也会影响PCR

前段时候也很纠结那16S的PCR 这是我的经验教训 希望能帮助你
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11楼2011-06-04 13:12:58
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 天使托 at 2011-06-02 14:53:45:
楼主的电泳图跑的很不给力啊。。。
首先你两条引物的Tm值一个是48，一个44，那你该最先确定一个46度啊。。。
可以上下浮动10度进行梯度PCR，如果还是没有条带，可能原因：
1：点点你的引物，看看能跑出来不？很 ...

嗨，你好。我现在做实验也遇到这种问题，你这里提到“点点你的引物，看看能跑出来不？”，是直接将引物跑胶吗？还是什么意思？谢谢指教。
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Things change, people grow.
12楼2011-12-01 10:26:17
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麻花13

新虫 (小有名气)
可以尝试一下巢式PCR啊，仅仅是个思路
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13楼2011-12-01 11:16:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
引用回帖:
12楼: Originally posted by 胡乱走走2011 at 2011-12-01 10:26:17:
嗨，你好。我现在做实验也遇到这种问题，你这里提到“点点你的引物，看看能跑出来不？”，是直接将引物跑胶吗？还是什么意思？谢谢指教。

是呀，一般引物都是可以跑出来的，不过跑时间短一些，然后照相就可以看出来的！
PCR跑不出条带有可能是引物的原因导致的，所以看看你的引物可靠不，就点样看看！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
14楼2011-12-02 10:33:59
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 天使托 at 2011-12-02 10:33:59:
是呀，一般引物都是可以跑出来的，不过跑时间短一些，然后照相就可以看出来的！
PCR跑不出条带有可能是引物的原因导致的，所以看看你的引物可靠不，就点样看看！

谢谢你。
我昨天电泳检测过引物了，但是没有条带，电压200V，电流400A，15m，点样量5ul，引物浓度100uM，你觉得那些条件不合适？电压偏高还是引物浓度太低，或者时间太长？
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Things change, people grow.
15楼2011-12-02 12:07:13
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jiying198509

新虫 (初入文坛)
还是先测一下模板浓度吧 太高的话 就要稀释 还有注意Mg2+浓度
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16楼2011-12-02 14:55:00
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若水wyl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by jiying198509 at 2011-12-02 14:55:00
还是先测一下模板浓度吧 太高的话 就要稀释 还有注意Mg2+浓度

不知道这具体的模板浓度是多少合适呢？
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任性
17楼2017-04-24 19:50:59
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