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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

萝卜丝儿(金币+1): 2011-06-05 15:11:50
引用回帖:
Originally posted by 萝卜丝儿 at 2011-05-29 17:23:58:
从公司买来了一段基因(3.7kb),那段基因是连在公司提供的质粒(2.7KB+3.7kb)上的,然后拿回来后就转入E.coli,然后就是扩增,提质粒,酶切跑电泳,切胶回收(3.7kb),再把那个基因连到我们实验室自己构建的载 ...

检查下你要连接载体上的酶切位点是否有存在与酶切片段相同的酶切位点,使你切下来的结果是3段3.7kb左右的片段和一个2.7kb左右的片段~因为你连接上去的话应该是3.7kb+7.3kb=11kb 仔细检查下所用酶切位点是否有多个这样的位点~
11楼2011-06-01 23:37:03
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萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-06-01 16:37:03:
检查下你要连接载体上的酶切位点是否有存在与酶切片段相同的酶切位点,使你切下来的结果是3段3.7kb左右的片段和一个2.7kb左右的片段~因为你连接上去的话应该是3.7kb+7.3kb=11kb 仔细检查下所用酶切位点是否有多 ...

酶切位点都检查过了,都没有问题。。。现在很纳闷,这个实验不止我一个人做过了,但是结果都是这样。。。同样用这个载体,这个酶切位点去连别的片段,结果都是好的。。。这个很纳闷。
好好学习,天天向上!
12楼2011-06-03 20:56:43
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萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-05-30 04:59:22:
超螺旋的速度可不是按规矩来的

你的没有切开的部分质粒是可以存在于你的大片段里的

你的对照做了吗

有没有直接把你回收的3.7kb片段做转化?有没有把你的3.7kb片段做一个自连,然后做转化?如果这个没 ...

对照组都做了,对照结果都是正常的。。。还有就是,切了很久,而且酶量也是相对于质粒的量要多的,还有就是用这个切下来的片段做别的另外几个片段连接,都得到想要的转化子了,还有就是另外两个博后也做了两遍,也是相同的结果,还有就是多谢批评!
好好学习,天天向上!
13楼2011-06-03 21:01:38
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

萝卜丝儿(金币+1): 2011-06-05 15:12:00
如果你对自己的实验操作十分有信心,那我建议要看质粒图了,包括公司和你构建用的,检查酶切位点,可能你构建的载体上有相同的酶切位点而导致了这种现象的出现。
14楼2011-06-04 11:31:03
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