24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4441)
>文献求助 (473)
>虫友互识 (416)
>导师招生 (380)
>考博 (212)
>博后之家 (188)
>硕博家园 (170)
>休闲灌水 (166)
>论文投稿 (141)
>基金申请 (96)
>考研 (77)
>招聘信息布告栏 (72)
>教师之家 (64)
>公派出国 (48)
>绿色求助(高悬赏) (47)
>找工作 (42)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 4009.8
散金: 2
帖子: 147
在线: 413小时
虫号: 1244266
注册: 2011-03-25
专业: 植物保护生物技术

[求助] 求助啊！转质粒出现问题了！

从公司买来了一段基因（3.7kb），那段基因是连在公司提供的质粒（2.7KB+3.7kb）上的，然后拿回来后就转入E.coli，然后就是扩增，提质粒，酶切跑电泳，切胶回收（3.7kb），再把那个基因连到我们实验室自己构建的载体（7.3kb）上，然后再做E.coli转化，但是很妖的事情发生了！！涂版以后，挑取长出来的单克隆，扩增，提质粒，酶切鉴定，得出的结果是3.7kb+2.7kb。。。做了好多好多遍都是这个结果，然后还用了菌落pcr鉴定那个质粒上的基因，结果是正确的。。这到底是怎么回事啊？

求各位帮忙啊！！

师兄一开始认为我实验技能不过关，然后自己上来做，也是这个情况，其他博后过来指导，结果也是这个，这到底是怎么回事啊？去磷酸化也做过了，但还是这个情况。。。

回复此楼

» 猜你喜欢

请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。已经有5人回复
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗已经有7人回复
申请2026年博士已经有5人回复
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入已经有5人回复
寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件已经有6人回复
2025冷门绝学什么时候出结果已经有7人回复
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗已经有6人回复
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了已经有7人回复
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢已经有5人回复
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生已经有6人回复

好好学习，天天向上！

1楼2011-05-29 17:23:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 4009.8
散金: 2
帖子: 147
在线: 413小时
虫号: 1244266
注册: 2011-03-25
专业: 植物保护生物技术

引用回帖:

Originally posted by silicare at 2011-05-30 04:59:22:
超螺旋的速度可不是按规矩来的

你的没有切开的部分质粒是可以存在于你的大片段里的

你的对照做了吗

有没有直接把你回收的3.7kb片段做转化？有没有把你的3.7kb片段做一个自连，然后做转化？如果这个没 ...

对照组都做了，对照结果都是正常的。。。还有就是，切了很久，而且酶量也是相对于质粒的量要多的，还有就是用这个切下来的片段做别的另外几个片段连接，都得到想要的转化子了，还有就是另外两个博后也做了两遍，也是相同的结果，还有就是多谢批评！