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lliuzhi

金虫 (正式写手)

[求助] PCR求助

采用两对引物扩增,引序列和电泳结果均标注在图上,1,2,3为平行实验。扩增的条带应有1002 bp,500 bp, 794bp, 292bp,但是电泳后无794 bp条带,却出现一500多bp的条带,请高人指教是怎么回事,谢谢!
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

lliuzhi(金币+5): 2011-05-30 22:33:28
其实你的电泳图上有跑出1kb大小的条带,只是不很亮,这是因为:在做mPCR时,引物之间会有竞争的,短片段的扩增数量会不长片段增加的快,当产物浓度到了一定阶段时会抑制酶的活性,从而影响整个的进程,建议调整退火温度,稍微优先考虑长片段。
另外多出来的片段很可能是你的某条引物错配引起的,建议调整退火温度。
11楼2011-05-29 23:56:31
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

请问您的PCR是做什么用的?为什么不分开P呢?
2楼2011-05-27 11:21:13
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

信息太少,无法应助。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-27 11:45:21
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-27 19:25:46
lliuzhi(金币+5): 2011-05-30 22:33:51
我觉得你的1002也不能确定是正确大小的条带,现在看来你的6F引物可能存在假引物,结合位置应该是在5F和6F之间,你可以blast一下,看看有没有我说的这种可能。另外,我也有二楼的问题,为什么要放在一起PCR?
4楼2011-05-27 12:11:23
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