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【求助】有关测细胞凋亡实验的问题
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我想请问下，做细胞凋亡实验，我想测以下几个指标，线粒体膜电位改变，cytc的释放，capase-3,9的活性，为了使试验方法更丰富，我是不是应该尽量避免试验方法的重复呢?比如说 线粒体膜电位检测可以用流式细胞仪，还可以JC-1染色再荧光镜检； cytc可以用流式和wb； caspase-3,9可以wb； 所以我打算设计成膜电位用JC-1，cytc流式，caspase用wb。但是有个问题是，cytc大多数都是用wb，极少数用流式，而膜电位很多用流式，很少用JC-1。那我为了试验方法丰富这么做的话会不会有什么问题，比如实验精确度之类的，而且我采用的方法会不会影响我以后发文章，还是只要那些重要的指标检测到了就好，方法哪一种都可以？ 实在是不知道如何定夺，希望高人指点！！谢谢~ |
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 分子生化实验经验积累 | 【分子生物】EPI帖 |
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5楼2013-04-04 19:58:15
2楼2011-05-27 09:51:28
jhu132llh
荣誉版主 (知名作家)
大洪
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3楼2011-05-27 21:31:47
cdl007
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【答案】应助回帖
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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-28 08:45:26
瘪(金币+2): 2011-05-28 16:02:53
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-28 08:45:26
瘪(金币+2): 2011-05-28 16:02:53
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凋亡事件分为 "启动期"、"凋亡早期"、"凋亡中期"和 "凋亡晚期"。从下图中可见： 1) Caspase 酶的激活是凋亡最早期的事件。Caspase 酶激活后剪切一系列细胞内的结构蛋白、调节蛋白和 DNA 修复蛋白，引发随后的凋亡事件； 2) 线粒体连接着若干个凋亡途径，在凋亡中扮演着重要的角色。线粒体膜电位的丧失和细胞色素 c 从线粒体的释放是线粒体被激活的两个最显著特征； 3) 细胞 PS(磷脂酰丝氨酸)的外翻紧随线粒体膜电位的丧失而发生，这是细胞凋亡中期的最明显标志； 4) 核碎片的形成及 DNA在核小体连接处断裂成低分子量的片段是细胞凋亡中晚期的标志性特征。 选择什么方法不是随便选择的，几个指标检测不应重复，方法的选择应该从各种角度准确的反映细胞凋亡过程中的变化，每个时期可以选择一种方法代表检测。 |
4楼2011-05-27 22:09:48
