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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 启动子扩增
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

[求助] 启动子扩增

有谁扩增过启动子，是比较难扩吗，我做了好几遍都没有条带，还有就是提的基因组大小应该是多少，我感觉我的偏小。
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1楼 2011-05-18 09:10:45
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weishengsu5
2楼2011-05-18 10:47:46
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

张力民1598(金币+1): 2011-05-18 19:16:57
张力民1598(金币+1): 2011-05-18 19:18:04
你是用基因组当模板扩增启动子吗？
一般呢，为保证启动子能够正常扩进去，是从前一个基因末尾100bp开始扩入序列直至目的基因的前100bp，这是最稳妥的方法。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-18 10:50:33
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

张力民1598(金币+1): 2011-05-18 19:17:33
基因组一般应该没有大小，是弥散的吧？
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4楼2011-05-18 12:57:32
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-18 10:50:33:
你是用基因组当模板扩增启动子吗？
一般呢，为保证启动子能够正常扩进去，是从前一个基因末尾100bp开始扩入序列直至目的基因的前100bp，这是最稳妥的方法。

那样岂不是要扩很长的片段吗
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5楼2011-05-18 21:39:52
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-05-19 14:13:53
张力民1598(金币+1): 2011-05-19 16:52:43
引用回帖:
Originally posted by 张力民1598 at 2011-05-18 21:39:52:
那样岂不是要扩很长的片段吗

这个因基因长度大小而定，如果基因间隔比较小，那么扩增出来的片段就比较小，如果偏大，那就相应偏大。。。其实没有太大关系，尽管扩吧。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-05-19 08:50:49
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zhangw

银虫 (小有名气)
你是用的什么材料做的？还有你用的材料的基因组序列是已知的么？已知和不知道方法是完全不一样的，所以你说明白了，大家才可以给你更好的建议，呵呵。
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7楼2011-05-19 14:20:37
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhangw at 2011-05-19 14:20:37:
你是用的什么材料做的？还有你用的材料的基因组序列是已知的么？已知和不知道方法是完全不一样的，所以你说明白了，大家才可以给你更好的建议，呵呵。

我提的是A549细胞的基因组
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8楼2011-05-19 16:52:32
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丁丁猫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

张力民1598(金币+1): 谢谢帮忙 2011-05-22 10:10:17
启动子的AT含量很高，有点不太好扩，你可以翻倍加dNTP，或者分段扩，最后再扩全长
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9楼2011-05-21 09:29:42
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

张力民1598(金币+1): 谢谢 2011-05-22 10:10:33
提出来的基因组大小只有看了你的图才能知道，一般按试剂盒提都是很容易获得的。
因为基因组中信息含量很高，所以会采用巢式PCR来P启动子序列。
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10楼2011-05-21 13:22:36
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