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牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)

[求助] 融合pcr怎么总是不成功啊

最近想将1100bp左右的两个片段通过融合pcr形成一个2200bp大小的目的片段,做个几次OVERLAPPING PCR ,开始是p不出目的条带,好不容易p出目的条带连到pMD18T上送去测序,结果只有一段600bp是我期中的一条目的片段的序列。不知道是为什么?请做过融合pcr的同志们指教,不胜感激。
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

牵着猎人的狼(金币+1): 2011-05-19 23:00:57
楼主,只有一点要注意,模板一定要浓,加的量要大,这个和普通PCR不同的地方,10UL体系你模板加到100NG,绝对能出来,但回收条带里面会有些混杂的带,可以做二次PCR
3楼2011-05-17 18:34:34
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