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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 融合pcr怎么总是不成功啊
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牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)

[求助] 融合pcr怎么总是不成功啊

最近想将1100bp左右的两个片段通过融合pcr形成一个2200bp大小的目的片段，做个几次OVERLAPPING PCR ,开始是p不出目的条带，好不容易p出目的条带连到pMD18T上送去测序，结果只有一段600bp是我期中的一条目的片段的序列。不知道是为什么？请做过融合pcr的同志们指教，不胜感激。
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1楼2011-05-16 20:06:31
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

牵着猎人的狼(金币+1): 2011-05-19 23:00:52
鉴于楼主的情况，最好能够先将这两个片段放入克隆载体，然后用这两个载体做模板进行融合PCR，选用一些保真性好，而且扩增效率又高的酶
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4楼2011-05-17 23:52:34
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

另外，不知楼主用于做模板的两个片段是否经过琼脂糖纯化，直接用PCR产物做模板虽说也可以，但效果不如前者好
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5楼2011-05-17 23:55:03
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cellline

木虫 (正式写手)
高保真的酶很多，比如全式金的fastpfu,这个酶还可以试试，不知你地处何处，可以看看其他公司相类似的酶。
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7楼2011-05-20 12:46:01
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