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tangtangdou

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光标记

请问荧光标记的方法是什么?急用
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jhu132llh

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大洪

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-05-12 20:06:33
能具体描述一下问题吗
这个太笼统了
不知道问题是:
1.怎么用荧光标记蛋白质
2.怎么用荧光标记法来检测蛋白质
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2011-05-12 09:21:41
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tangtangdou

新虫 (初入文坛)

在荧光标记微管和微丝的过程中,发现荧光标记物总是出现标记不上的情况,请问这种情况怎么处理?
3楼2011-05-12 17:21:51
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by tangtangdou at 2011-05-12 17:21:51:
在荧光标记微管和微丝的过程中,发现荧光标记物总是出现标记不上的情况,请问这种情况怎么处理?

我可以理解为你是在做微管和微丝的免疫荧光染色
然后染不上荧光是吧
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
4楼2011-05-13 09:05:20
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jhu132llh

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大洪

【答案】应助回帖

tangtangdou(金币+3): 谢谢!!! 2011-05-14 16:35:22
若是涉及到免疫荧光染色的话
我倒是可以帮上你一点忙
姑且认为你是做免疫荧光
若不是的话你就路过一下就好了

免疫荧光的原理很简单:
就是一抗结合抗原蛋白,二抗结合一抗,二抗上偶联了荧光基因,在激发光下发光,从而在显微镜下可以观察到特殊部位有荧光着色
发生荧光染不上的原因有很多的:
1.一抗是否有机会能和抗原结合,也就是说抗原抗体反应是否成立;如果你染的是胞质蛋白而你又没通透,那么你的抗体就没有机会和抗原反应,那肯定是不会着色的,
正如你的微管和微丝,它是胞质成分,一定要通透才会染色的;
2.抗原抗体反应是否充分,不充分会引起染色浅,从而与阴性对照区别不大,无法判定阳性结果;
3.抗体是否能在这个动物中特异性结合抗原,每一个抗体设计的针对动物的有限的,当用在其他动物中时,就得考虑同源性了,若是同源性不够,就容易发生染不上的结果;最还是选用抗体说明书中提到的特异性高的动物的抗体做免疫荧光;
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
5楼2011-05-13 09:15:15
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tangtangdou

新虫 (初入文坛)

在标记以后用共聚焦拍照,想知道为什么分生区的图像没有伸长区图像效果好,分生区没有伸长区标记的好?
6楼2011-05-14 16:37:16
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yhj-完美

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jhu132llh at 2011-05-13 09:15:15
若是涉及到免疫荧光染色的话
我倒是可以帮上你一点忙
姑且认为你是做免疫荧光
若不是的话你就路过一下就好了

免疫荧光的原理很简单:
就是一抗结合抗原蛋白,二抗结合一抗,二抗上偶联了荧光基因,在激发光下 ...

不是结不结合都发光吗
7楼2017-11-10 00:27:48
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