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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
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小皮球邓

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎应助 2011-05-10 17:52:21
以我的经验，你扩增出来的是引物二聚体。
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坚持就是胜利！
11楼2011-05-10 12:28:30
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f_luckyboy

新虫 (初入文坛)
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12楼2011-05-10 13:55:01
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小皮球邓 at 2011-05-10 12:28:30:
以我的经验，你扩增出来的是引物二聚体。

非常感谢！我原来也以为是引物二聚体，但是电泳条带的位置不是引物二聚体得得位置，并且我已经对扩增片段进行了测序，测序结果能跟网上基因库的同源基因完全比对，应该不是引物二聚体。
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13楼2011-05-10 17:45:07
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小皮球邓

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 小皮球邓 at 2011-05-10 12:28:30:
以我的经验，你扩增出来的是引物二聚体。

那你就试试重新设计引物。一段基因分成两段来设计引物，最后加上你现在已经设计好的引物。不知道你有没有做过这方面的实验。
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坚持就是胜利！
14楼2011-05-10 19:11:06
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 学习了！ 2011-05-11 00:22:28

爱上基因合成了
提不出来，就合成
O(∩_∩)O~最省事省时间了，还能直接优化序列
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15楼2011-05-10 19:35:30
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by roomofxw at 2011-05-10 19:35:30:

爱上基因合成了
提不出来，就合成
O(∩_∩)O~最省事省时间了，还能直接优化序列

呵呵，直接合成在我们实验室好像不太好办呀，不过同样谢谢你哈！
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16楼2011-05-10 22:13:47
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roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shenhaiwang at 2011-05-10 22:13:47:
呵呵，直接合成在我们实验室好像不太好办呀，不过同样谢谢你哈！

其实以前我也以为挺难的
不过时间不紧的话，那还是从基因组里面提吧
花费还是相对不少的
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17楼2011-05-10 22:26:52
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by roomofxw at 2011-05-10 22:26:52:
其实以前我也以为挺难的
不过时间不紧的话，那还是从基因组里面提吧
花费还是相对不少的

嗯，那我试一下吧，期望有个好结果呀！呵呵，谢谢你哈！
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18楼2011-05-11 09:50:40
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sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 好主意 2011-05-11 13:49:55
可能是引物设计的不好，出现了非特异条带。全基因不好设计引物，可以分段设疑引物，分段P。
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19楼2011-05-11 11:03:16
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sfb1020 at 2011-05-11 11:03:16:
可能是引物设计的不好，出现了非特异条带。全基因不好设计引物，可以分段设疑引物，分段P。

嗯，很有可能，我现在又设计了两对引物，分段P试试，看一下结果吧。呵呵，谢谢你哈！
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20楼2011-05-11 13:48:01
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