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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE求助~~HELP!
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cyq880205

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE求助~~HELP!

最近几次制胶都长时间不凝，望高手帮忙分析一下
分离胶12%
H20 3.3ml
30% 4ml
1.5M HCl-Tris (8.8)   2.5ml
10% SDS   0.1ml
10% AP  0.1ml
TEMED   10ul

浓缩胶5%
H2O 2.1ml
30% 0.5ml
1.0M HCl-Tris 0.38ml
10% SDS   30ul
10% AP  30ul
TEMED   3ul




分离胶加大TEMED的量到20uL也不凝，用水封了，时间还是较长，浓缩胶问题比较严重好几个小时都不凝，催化剂量也加大了，还是不凝，用水做实验也不凝，30%Acr-Bis也是新配的，AP也重新配了，大家帮帮忙啊，冬天同样的配方都能凝的

[ Last edited by cyq880205 on 2011-5-3 at 10:16 ]
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1楼 2011-05-03 10:07:47
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BigPlum

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-05-05 18:20:41
TEMED和APS很可能的一个问题。温度问题的话，可以试试配好后，放到37℃恒温培养箱里面试试，但是要保证恒温培养箱温度均匀，否则会导致局部胶浓度过高。不过，这都夏天了，应该不是温度问题，还是重配下APS和TEMED。APS还好吧，我最近配的APS，放在冰箱冷藏，能用1个礼拜啊。是不是你的APS本来就坏了？
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13楼2011-05-04 19:31:01
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

cyq880205(金币+3): 2011-05-03 11:47:26
看天(EPI+1): 鼓励一下啊 2011-05-03 18:51:11
1.首先确定你的30%凝胶储液配置的是否正确，丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是否添加的正确  比例是否正确
2.你配胶的时候你们室内的温度是不是很低，PAGE胶偶联是一个吸热反应，如果温度 太低的话 也是会造成很难凝固的   建议温度在20-30度
3.加大AP 和 TEMED的用量  不过我看你的配方里面的用量已经可以了
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与人玫瑰手有余香
2楼2011-05-03 10:41:22
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cyq880205

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 路人甲007 at 2011-05-03 10:41:22:
1.首先确定你的30%凝胶储液配置的是否正确，丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是否添加的正确  比例是否正确
2.你配胶的时候你们室内的温度是不是很低，PAGE胶偶联是一个吸热反应，如果温度 太低的话 也是会造成很难凝固 ...

室温25℃左右，凝胶储存液是29g丙烯酰胺和1g甲叉丙烯酰胺混合定容到100mL的
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3楼2011-05-03 11:05:49
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lj206141

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

cyq880205(金币+2): 2011-05-03 11:47:20
检查一下过硫酸铵是否过期或者吸潮，有必要的话换一瓶重新做一下
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4楼2011-05-03 11:06:52
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