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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELIAS原理
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hflf

金虫 (小有名气)

[交流] ELIAS原理 已有1人参与

各位好，最近开始做ELISA方面的实验，我学习了下ELISA的原理，看见所谓的夹心法和间接法，感觉有点迷糊，这所谓的两种方法，在我看来试验步骤完全相同，不过是最后加的东西的名称不一样而已，所谓的间接法我感觉挺直接的啊，他怎么就间接了呢？不就是酶标的抗人免疫球蛋白抗体与受检抗体结合了，不就是直接结合了么，怎么就间接了呢？
和同学讨论了这些问题，他们说我理解能力太差（也可能是吧），但是又说不出所以然，而我还是固执己见，望哪位也给我解释一下啊！
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行到水穷处，坐看云起时！
1楼 2011-04-28 10:02:34
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
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从我接触到得常规ELISA来说，ELISA就是检测2种分子结合，先固定一种物质A，再加另外一种物质B去结合，
比如，直接法就是直接固定A，间接法就是通过固定其他与A特异结合的物质C来捕获A，再用B去和A结合，
因为直接固定A，可能会影响到A的活性或表位。
至于结合之后用什么试剂去检测，与直接法或间接法的定义是无关的。
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2楼2011-04-28 12:39:11
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
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至于夹心法，只是一种习惯说法。可以去找一些ELISA format的示意图看看就了解了
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3楼2011-04-28 12:44:08
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hflf

金虫 (小有名气)
间接法也是直接固定A，然后用B去结合啊，最后用的是抗抗体来检测与A结合的B的啊，这不也是直接法么，不就是抗抗体与B结合了然后显色的啊？结构也是固相-A-B-抗抗体，这不就是直接法么？
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行到水穷处，坐看云起时！
4楼2011-04-28 14:15:25
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hflf

金虫 (小有名气)
这不是很直接么？刚还看了ELISA的反应图示，直接法或是间接法，都是这样的结合图示啊：固相-A-待检测B-酶联物，怎么就间接了呢？
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行到水穷处，坐看云起时！
5楼2011-04-28 14:21:03
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hflf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-04-28 12:39:11:
从我接触到得常规ELISA来说，ELISA就是检测2种分子结合，先固定一种物质A，再加另外一种物质B去结合，
比如，直接法就是直接固定A，间接法就是通过固定其他与A特异结合的物质C来捕获A，再用B去和A结合，
因为直 ...

刚在网上又找了半天，才看到原来有直接法这个方法，我一直以为夹心法是直接法呢，其实夹心法不过是抗原抗体作用方式不同而已，应该也算着间接法的一种啊，应该可以这么理解吧？
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行到水穷处，坐看云起时！
6楼2011-04-28 14:31:29
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by hflf at 2011-04-28 14:15:25:
间接法也是直接固定A，然后用B去结合啊，最后用的是抗抗体来检测与A结合的B的啊，这不也是直接法么，不就是抗抗体与B结合了然后显色的啊？结构也是固相-A-B-抗抗体，这不就是直接法么？

直接法：固相是A
A-B-二抗（抗抗体）

间接法：固相是C
C（C可以结合A）-A-B-二抗


夹心法就是间接法的一种
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7楼2011-04-29 09:32:26
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