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秋电工

新虫 (小有名气)

[交流] 青枯菌半选择性培养基---TTC培养基,你信几分? 已有8人参与

从Kelman他老人家介绍TTC培养基后(具体见The relationship of in pseudomonas solancearum to colony appearance on a tetrazolium medium),青枯菌的分离培养基似乎用的都是TTC培养基。有文献神乎其神管TTC培养基为青枯菌的选择性培养基,保守一点的管它为半选择性培养基。

好吧,既然大家伙儿都用这个培养基来分离,而且也没有别的了,随着青枯菌的分离大军,我也开始了漫漫的青枯菌分离生涯。按各种文献的介绍,青枯菌在此培养基上有流动性、颜色呈红或粉红(不同描述都有)的菌落出现。分出来后,因培养性状均为主观描述,所以为了以防万一,保种时把各类文献提及到的形态颜色都保了起来。为了鉴定它们是不是,我开始了革兰氏染色、显微、生理生化、致病性实验。ok,8个菌株只有一个致病性低与参照菌株(番茄青枯菌),其余都能快速强烈引起青枯症状。老板笑了,我也笑了,可能它们是了。

于是跟老板说,那测序吧,做个16SrRNA支持下。悲剧来了,测序后没有一个是pseudomonas solancearum,分别与欧文氏、黄单胞菌、丁香假单胞菌中的种同源。查书,发现细菌命名的混乱,甚至科、目阶元都会变。青枯菌的异质性也有人阐述,可就是没人去颠覆这个种的命名和归属。青枯菌侵染50多科,300多种植物,它若都是genbank里“学者们”公布的那个序列,那这个菌的胃口也太好了吧!

于是,我邪恶的想,可能其他人在做青枯菌的时候,尤其是茄科以外的寄主植物,也许也面临我这样的困惑。大家都闷着不敢说而已。(自恋和狂妄源自无知,无知无畏,各位见谅啊!)

现在要写论文了,老板让我尽量去寻找欧文氏和黄单胞与假单胞菌属的渊源,说明青枯菌的异质,告示大众,青枯菌应该是一类造成青枯症状的若干种,甚至属的混合菌。好大鸭梨。老板大概也觉得这篇论文收尾困难,于是喝斥,你这个TTC半选择性培养基到底有多大的专属性呀?怎么分了半天,把欧文氏和黄单胞养出来了?

我问天去呀!我倒也纳闷!

园子里有朋友也玩这个吗?你们知道TTC培养基除了方中达的《植病研究方法》有提,还有什么文献或理论可以支持TTC培养基是青枯菌的半选择性培养基么?被老师批过后,我查了查,和TTC发生生理生化反应显红色或粉色的不止青枯菌,很多细菌都会,而且植物、动物细胞都会。

您是怎么理解的呢?最好能附上支持您这番理论的文献出处。

ps:哪位好心人能找到1954年Kelman的The relationship of in pseudomonas solancearum to colony appearance on a tetrazolium medium,一个字一个字把它们吃进去。邮箱:qiudiangong@126.com不甚感激!
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zier1011

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
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rainwander(金币+3): 鼓励交流 2011-04-27 19:51:37
文献太老了
氯化三苯基四氮唑(TTC)不只是与青枯菌发生显色反应,所有的菌都会,你看一下原理就知道。至于你说的流动性、平滑、带白色晕圈的情况,我敢断定,这种外观的出现跟TTC无关,流动性、平滑可能是青枯菌菌落本来具有的特点,带白色晕圈应该是青枯菌可以分解培养基中某种可溶性物质产生不溶性物质而产生的——这种性质其它菌也有的可能具有。
你最好把配方发上来,究竟会造成什么样的干扰才好分析
花还香香的
4楼2011-04-27 13:23:34
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zier1011

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
这个我有点纳闷,楼主所说的TTC培养基难道是一种特殊的TTc培养基?据我所知,TTC培养基一般作为菌落总数培养基,只要是能够生长的细菌,都会显红色或者粉红色,假单胞菌显色多正常的事啊
花还香香的
2楼2011-04-26 18:14:09
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秋电工

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2011-04-26 18:14:09:
这个我有点纳闷,楼主所说的TTC培养基难道是一种特殊的TTc培养基?据我所知,TTC培养基一般作为菌落总数培养基,只要是能够生长的细菌,都会显红色或者粉红色,假单胞菌显色多正常的事啊

楼上的朋友,“Kelmans研究出专门勇于青枯菌的TTC培养基,该培养基中还有0.005%的2,3,5-氯化三苯基四氮唑,可与青枯菌发生生化反应,使之在这种培养基上呈现流动、平滑、带白色晕圈的红色菌落,这一培养基可特异性区分青枯菌和其他细菌”-----出自The relationship of pathogenicity in pseudomonas solanacearum to colony appearance on a tertrazolium medium,今天我试图四处搜索这篇原文,原文没找到,倒是看到198几年某报道评论该文章“The SCI indicates that this paper has been cited in over 150 publication since 1961,make it one of the most-cited papers ever published in this journal”。如此牛气,到底是谁望文生义了?
3楼2011-04-26 18:36:39
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秋电工

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2011-04-27 13:23:34:
文献太老了
氯化三苯基四氮唑(TTC)不只是与青枯菌发生显色反应,所有的菌都会,你看一下原理就知道。至于你说的流动性、平滑、带白色晕圈的情况,我敢断定,这种外观的出现跟TTC无关,流动性、平滑可能是青枯菌 ...

分离之前只是去查阅了该菌的分离方法,说法一致,都用TTC培养基,也没有深究。现在回头才发现TTC测菌、植物、动物细胞活力都可以才傻眼了。
青枯菌TTC培养基配方如下:
细菌学蛋白胨10g;酸水解酪蛋白1g;葡萄糖5g;琼脂18g;蒸馏水加至1000ml;pH7.0,灭菌放凉加经过滤灭菌浓度为5%的TTC1ml于培养基中,摇匀,倒平皿
5楼2011-04-27 22:06:47
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