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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Elisa 包被
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
引用回帖:
Originally posted by waiwaidou_1983 at 2011-05-04 14:33:38:
买了一个公司的包被液，还是不显色

我想换个方法。

先包被抗体，

封闭

然后再加我的标样和测试样品

再加之前包被的那个抗体

最后加二抗

就是想用一抗把样品捕获

不知道可不可以

崩 ...

可以的
夹心法和间接发的结合
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
11楼2011-05-04 15:23:04
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waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-04 15:23:04:
可以的
夹心法和间接发的结合

十分感谢
我这里只有一种一抗，包被的一抗 没和样品结合的，是不是还会和最后加的二抗结合，那样就不行了吧？
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12楼2011-05-05 16:36:47
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

waiwaidou_1983(金币+35): 谢谢，我不是很明白，能详细一点吗？就是觉得二抗要不就是和与样品蛋白结合的一抗结合，要不就是和包被的一抗结合，总之测出来的都是包被的抗体的量 2011-05-06 10:29:41
呵呵
没事
你做一个补加样品蛋白的对照做阴性对照就可以了
然后你用测出来的OD值减去这个对照再减去空白对照出来就可以的了
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
13楼2011-05-05 18:21:44
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): good 2011-05-06 18:17:36
是的
二抗结合的位点为外乎就两个
一个是包被的一抗中的结合位点，这个是不需要的结合
可以当做是背景一样的，记为A，未知
二个是与抗原结合的一抗上面的识别位点结合，这个是我们所需要的数据，记为B，未知
但是上机检测的是这两个数据的和对吧，记为C，可以被测量出来
就是C=A+B
但是我们只要B这个数据
所以我们就需要测量出A这个数据来
才来由B=C-A得出B的值
所以，我们做一个只有包埋的一抗+抗原+二抗（抗原结合后的一抗孵育改为抗体稀释液孵育补加一抗）的条件，这个条件就是阴性对照，就是背景值，也就是A
然后，我们就知道B值了
不知道我这样说讲清楚了没
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
14楼2011-05-06 15:05:48
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waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-06 15:05:48:
是的
二抗结合的位点为外乎就两个
一个是包被的一抗中的结合位点，这个是不需要的结合
可以当做是背景一样的，记为A，未知
二个是与抗原结合的一抗上面的识别位点结合，这个是我们所需要的数据，记为B，未知 ...

明白了，谢谢，十分感谢。
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15楼2011-05-07 14:48:53
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waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-06 15:05:48:
是的
二抗结合的位点为外乎就两个
一个是包被的一抗中的结合位点，这个是不需要的结合
可以当做是背景一样的，记为A，未知
二个是与抗原结合的一抗上面的识别位点结合，这个是我们所需要的数据，记为B，未知 ...

我单独的将二抗包被在板子上，洗了一下，加显色液不出东西， 原来二抗也很难包被啊，本来是想看看我的洗涤液有问题，也看不了了
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16楼2011-05-08 16:11:13
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by waiwaidou_1983 at 2011-05-08 16:11:13:
我单独的将二抗包被在板子上，洗了一下，加显色液不出东西， 原来二抗也很难包被啊，本来是想看看我的洗涤液有问题，也看不了了

不是吧
这样的话
试试二抗、显色液、还有洗涤液这个体系是不是有问题
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
17楼2011-05-08 18:32:00
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waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-08 18:32:00:
不是吧
这样的话
试试二抗、显色液、还有洗涤液这个体系是不是有问题

我之前在公司买的显色液，没怀疑过，现在在200微升显色液中 加了0.2ul未稀释的二抗 不显色，看来是显色液的问题了
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18楼2011-05-10 15:57:25
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

呵呵
还好找着原因了
祝你好运一次成功了
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
19楼2011-05-10 20:59:40
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