24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1289  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

513279618

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切求救

各位大侠,我实在想不明白了!!
我的重组质粒用单酶切切不下来,双酶切就能切成三段,会是什么原因呢??!!
已经切过两次了,都是这种情况!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

513279618(金币+2): 2011-05-02 21:55:59
测序吧。这个更准确。可能是酶的量的问题,某种酶在buffer中酶活降低,导致产生了有单切(现象)双切(长短2条带)共3条带。改变buffer比例(每种buffer一半,或者看NEB双切buffer),可能就变成了2条带了。
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
11楼2011-04-28 23:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★
513279618(金币+1): 2011-04-24 10:33:19
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流,欢迎常来 2011-04-25 20:16:31
1.确定酶没有失活
2.确定单酶切的时候buff对了吗,酶的在buff中活性怎么样,酶切的时候酶量是否足够,酶切体系是否很好
3.确定双酶切的时候不是用于单酶切的那个酶在载体上的酶切位点的单一性
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2011-04-23 19:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-25 20:16:43
单酶切切不下来是指什么?切了之后片段大小不对?双酶切时用的其中一种酶是单酶切用的那种吗?如果是,会不会单酶切的时候体系不太好,酶量不够。双酶切时使用的另一种酶是不是在重组质粒上只有一个酶切位点。
修炼ing,当虫仙……
3楼2011-04-25 09:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

513279618

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by j2 at 2011-04-25 09:10:27:
单酶切切不下来是指什么?切了之后片段大小不对?双酶切时用的其中一种酶是单酶切用的那种吗?如果是,会不会单酶切的时候体系不太好,酶量不够。双酶切时使用的另一种酶是不是在重组质粒上只有一个酶切位点。

我进行双酶切的时候,两种美都进行单酶切了,其中一个单酶切没有切出条带,另一个单酶切切出两条带,双酶切是三条带。所以我郁闷了!!
4楼2011-04-26 21:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见