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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题!

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算比活力;而毕赤酵母表达是胞外分泌,因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果,后者是前者的一半!

这个这么解释啊?一般来说,酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗?怎么比活力反而会低于细菌呢?

P.S.该目的基因富含AT,来自真菌
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xiajungang

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-24 15:29:53
一般来说大肠杆菌比酵母的蛋白表达量要高的,你比较的是混合蛋白(破碎液和发酵上清)的比活力吧。我觉得你的大肠体系要比酵母中目的酶的含量更高些,可以进行SDS-PAGA。尽量保证上样总蛋白(mg)一样,看看目的酶含量的差异就知道了。希望能帮到你。
吃苦耐劳,勇于创新,乐观热情,积极向上!
13楼2011-12-24 00:41:30
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