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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题!

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算比活力;而毕赤酵母表达是胞外分泌,因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果,后者是前者的一半!

这个这么解释啊?一般来说,酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗?怎么比活力反而会低于细菌呢?

P.S.该目的基因富含AT,来自真菌
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-23 16:51:23
引用回帖:
Originally posted by melodyxin at 2011-04-22 21:54:19:
在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算 ...

酶的活性跟除了跟表达量,最主要的还是跟其形成的空间结构有关的,同样表达量的酶空间结构不同,活性自然相差很远了。猜测是你的酶在大肠杆菌中更有利于正确折叠,形成有活性的空间结构。优化表达条件后可能情况会改变的。
9楼2011-04-23 16:16:29
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