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111602

木虫 (著名写手)

[交流] 线性化及完整的质粒电泳问题。 已有8人参与

最近在做实验过程中,遇到要将质粒先线性化,发现用酶切后电泳,与未酶切的质粒相比,跑的速度要快,不知是何原因,这些质粒都非空载,有些不理解,一般线性后跑的速度应该比超螺旋快才对啊。请高手指教!

首先感谢各位的讨论和建议。但必须说明一点,这个质粒是重组的,而且选择的酶只有一个酶切位点,电泳用的是1% AGAROSE GEL. 120V  30MIN.并且可以肯定已经被线性化的了。因为后继实验如果没有被线性化是无法成功的。


大家的回答都是建立在理论分析基础上的。我也赞同这一理论,但不知道有没有真正做过这一实验的朋友,可能我的实验(电泳)出了问题,但希望有实践经验的朋友给点意见。

[ Last edited by 111602 on 2011-4-21 at 01:42 ]
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天使托

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T.Shen

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1949stone(金币+2): 知错能改 善莫大焉 2011-04-20 11:22:55
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-04-20 11:06:52:
恩,谢谢,去看看

我刚才去请教实验室诸位高手,大家一致认为开环跑的最慢,其实是线性,最快的是超螺旋,哎。。。学艺不精啊。。。。不好意思啊。见谅!

我说的那本书上面有提到,可能我把意思没有搞清楚。。。。
再次不好意思!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
11楼2011-04-20 11:13:31
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天使托

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T.Shen

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dhd997(金币+2): 有道理 2011-04-20 09:38:50
线性化以后应该跑的慢吧?应该比环状的大一些
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-04-20 09:02:49
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111602

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-20 09:02:49:
线性化以后应该跑的慢吧?应该比环状的大一些

这个可未必,也看到好多人反映这个问题。不知道有实际做过的没有。
3楼2011-04-20 09:14:00
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天使托

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T.Shen

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1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-20 10:45:50
引用回帖:
Originally posted by 111602 at 2011-04-20 09:14:00:
这个可未必,也看到好多人反映这个问题。不知道有实际做过的没有。

什么叫未必如此?
质粒一般有三种状态,线性质粒;开环的;超螺旋的;一般前以最快的是超螺旋,其次是开环的,然后才是线性的。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-20 10:05:43
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