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花样年华

[交流] 请教MTT和trypan blue方法进行细胞毒性诱因的判断(送20金币)

借宝地移以用,有问题pm我,立即更改!!谢谢版主!!
MTT和trypan blue方法进行细胞毒性诱因的判断(送20金币)


应助supporter金币双倍奖励

Supporter求助:MTT和trypan blue方法进行细胞毒性诱因的判断

领金币处和帖子地址:
http://muchong.com/bbs/viewthread. ... d=P4mf1m#pid2195850

用MTT法进行了细胞毒性的研究,结果以IC50值表示。 在同样条件下用trypan blue 的方法进行了细胞毒性研究对mmt方法进行补充,结果同样以IC50值表示。

能否通过以上两种方法判断此药物对目标细胞粒的细胞毒性源自于growth arrest 还是 necrosis。如果可以应该怎么通过数值结果进行判断,比如两种方法得到的ic50差别不大或相差很大,那么细胞毒性的诱因是上述那种!并且这种方法可靠吗?能否分别予两种细胞毒性诱因 growth arrest 和 necrosis 反应在MTT和胎盘蓝实验结果上的不同!

谢谢!若有相关文献希望提供!!

越详细越好,希望做过的虫子发表意见,网上的搜索资料我也做过,只是有些不懂希望生物医学的虫子帮忙!

Email:emuchsupporter@163.com
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wj_21cn

木虫 (正式写手)


whxhxq(金币+1):谢谢!
MTT是利用,活细胞内 线粒体脱氢酶能将四氮唑化物(MTT)由黄色还原为兰色的甲肷,然后来看是不是细胞是活的.
而台盼蓝,是可以穿透死细胞的膜,所以能够染死细胞.
所以,这个两个方法都是区分死细胞和活细胞,至于细胞怎么死的,这两种方法并不能有太大说服力.
lZ似乎是要区分到底是生长抑制细胞,还是让细胞坏死(necrosis)
其实这个似乎可以从形态学上来区分,生长抑制的话,细胞一般都长不大,但是不一定死去.
而Necrosis的话,会有很多特征,比如细胞膜崩解,等等.
甚至,是药物诱导的调亡都有可能.
如果要区别药物诱导的调亡和Necrosis就很简单了.
各种方法都有.
所以,你要区分是什么细胞毒性,可能要借助别的方法.
而且,一般药物的细胞毒性,似乎不是诱导细胞调亡就是坏死.
当然也有你说的生长抑制,如果是这样,那就很可能是不是阻断了一些代谢途径等等.
随便说说,欢迎讨论.
2楼2006-09-11 13:38:04
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花样年华

因编辑说要做tb来判断细胞毒性是生长抑制还是坏死!!

谢谢讨论
一般药物的细胞毒性,似乎不是诱导细胞调亡就是坏死
3楼2006-09-11 21:37:26
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wj_21cn

木虫 (正式写手)

TB可以区分死细胞和活细胞.
而MTT仅仅可以区分,代谢旺盛和代谢不旺盛的细胞.
有这样一种可能,就是生长抑制,细胞代谢不旺盛但是不死.
这种情况下,
生长被抑制的细胞就是TB不能染色,同时MTT也不反应.
而Necrosis的细胞就是TB能染色,同时MTT也不反应.

同时,从你的意图来看,似乎是要看看这个complex对特定cell line的作用.
就是细胞毒性作用,具体到最后,是怎么作用与这个细胞的.
那大致就是几种可能.
1.Necorsis坏死
2.Apoptosisi调亡
3.Growth arrest.
区分1/2与第三种细胞,很简单,因为前两种细胞都挂了,而3细胞还活着,TB不能染色.
区别1和2两种细胞,也很多方法.
Annexin V,Tunnel,Caspase等
形态学,核染色等等,都可以.
我觉得,似乎还需要多做写工作.
因为,很多药物其实是诱导调往,所以需要AnnexinV,Tunnel等方法来看看是诱导调亡.
很大可能最后还需要做,调亡途径的检测.看看是诱导那个凋亡途径.
因为如果诱导Necrosis,似乎就没有特异性,能杀死所有细胞,包括正常细胞.
而诱导特定细胞的调亡,就能只作用与靶向细胞,有很大使用价值

[ Last edited by wj_21cn on 2006-9-11 at 22:39 ]
4楼2006-09-11 22:35:30
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