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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】是PCR条件不对还是引物的原因？（附电泳图）
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meizishu

禁虫 (小有名气)
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11楼2011-04-15 12:55:11
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meizishu

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12楼2011-04-15 12:56:03
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主
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dhd997(金币+2): 有道理 2011-04-18 08:12:57
引用回帖:
Originally posted by meizishu at 2011-04-15 12:55:11:
由于是老板设计的印务，准备再做摸摸条件，也在学习使用primer5.0设计引物。估计还不行扩增只能重新合成引物。谢谢。

不要拘于老板。老板也有犯错误的时候。但是此处我觉得应该问题不大哈。

这年头老板做实验的 除非是年轻小老板，很少见到亲自做实验的了！
楼主运气好啊，跟老师多多学习！
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
13楼2011-04-15 14:42:58
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lcy1971

银虫 (小有名气)
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dhd997(金币+5): good 2011-04-18 08:13:08
胶的浓度太高了。一般最大也就2%，可分离50-2000bp。
图1中泳道1和3的点样孔都很亮，说明有大分子没电泳下来，很可能模板加多了，胶又太浓，就聚集在点样孔附近了。
对多数引物来说，46度退火太低，应该提高，具体要看引物的退火温度了。
你不会真的用T4 ligase做PCR吧。
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14楼2011-04-15 16:23:36
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meizishu

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15楼2011-04-15 16:32:02
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cyz20050505

木虫 (正式写手)
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dhd997(金币+3): good 2011-04-18 08:13:20
做PCR，一般都应该做过阳性对照和阴性对照，这样了出了问题好判断，你这“咔”扩不出来，谁能一下就找到原因，所以对照是不能省的。依据我的经验，加样啥的，试剂啥的都应该不会错，我严重怀疑引物，不要迷信根据已知模板设计的引物就好使，这个观点是错的，重新设计两对试下，省时省事。
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16楼2011-04-17 22:38:16
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meizishu

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17楼2011-04-18 09:49:28
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