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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 【求助】固定化酶技术
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nono2009(金币+5, 食品EPI+1): 鼓励应助 2011-04-13 09:26:18
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 10:15:10
由于酶反应随着时间的延长，反应速度会逐渐降低，反应后酶不能回收，这就限制了酶的应用范围。如果能将酶固定在惰性支持物上制成固定化酶，仍具有催化作用，还能回收反复使用，并且生产可以连续化、自动化。
㈠ 包埋法
　　包埋法可分为网格型和微囊型两种，将酶包埋于高分子凝胶细微网格中的称为网格型，将酶包埋于高分子半透膜中的称为微囊型。包埋法很少改变酶的高级结构，酶活回收率较高，因此可以应用于许多酶、微生物和细胞器的固定化。但是在包埋时发生的化学聚合反应，容易使酶活力降低，需要设计适宜的反应条件。载体通常采用惰性材料，载体上酶的活性是由结合的酶量(通常为载体材料质量的0.1％～10％)和酶的活力(0.1～500 U／mg)决定的。因此，可以通过调整结合到特定载体上的酶的数量，来调节固定化酶的活力。
㈡ 吸附法
⒈ 物理吸附法
　　酶被吸附于不溶性载体的一种固定化方法。此类载体很多，无机载体有多孔玻璃、活性炭、酸性白土、漂白土、氧化铝、硅胶、膨润土、羟基磷酸灰石、磷酸钙、陶瓷、金属氧化物等；天然高分子载体有淀粉、白蛋白、纤维素衍生物等；大孔型合成树脂等。
⒉ 离子吸附法
　　这是酶通过离子键吸附于有离子交换基的水不溶性载体的固定化方法。用于此法的载体有阴离子交换剂如DEAE-纤维素，DEAE-葡萄糖凝胶，Amberlite IRA-93，IRA-410，IRA-900；阳离子交换剂如羧甲基纤维素，Amberlite CG-50，IR-120，Dowex-50等。
㈢ 共价偶联法
　　这是酶与载体以共价键结合的固定化方法。共价偶联法所用载体主要有：天然有机载体、无机载体、合成聚合物等。酶分子中可以形成共价键的基团主要有：α-氨基或ε-氨基，α、β或γ位的羟基、巯基、咪唑基、酚基等。
要使载体与酶形成共价键，必须首先使载体活化，即借助于某种方法，在载体上引进某一活性基团。然后此活性基团与酶分子上的某一基团反应，形成共价键。
㈣ 交联法
　　借助于双功能或多功能试剂使酶与酶或微生物细胞与微生物细胞之间发生交联反应，制成网状结构的固定化酶方法称为交联法。交联法也可用于含酶菌体碎片的固定化。
参与交联反应的酶蛋白的功能团有N末端的α-氨基、赖氨酸的ε-氨基、酪氨酸的酚基、半胱氨基的巯基和组氨酸的咪唑基等。作为交联剂有形成希夫碱的戊二醛，形成肽键的异氰酸酯，发生重氮偶合反应的双重氮联苯胺或N,N’-乙烯双马来亚胺等。其中最常用的交联剂是戊二醛，它有两个醛基，这两个醛基都可与酶或蛋白质的游离氨基反应.
㈤ 非共价结合法
　　对于在水不溶的有机相中进行的反应，最简单的固定化方法是结晶法和分散法。


根据你的酶的不同，可能会有相对于更适合的固定化方法，楼主还要根据自己的酶来选择方法。


至于实验过程，无非就是确定载体，最适合PH，固定化试剂，温度，时间，等等。
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充实的活着！
3楼2011-04-13 09:14:45
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