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【求助】液相问题，大家平时又是怎么设置最后一针Wash的参数呢？ 已有3人参与
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大家在走完HPLC样品后是怎么设置洗针的，道理是什么？ 最近实验室进了一台日立HPLC仪，听装机器的工程师说，每次走完样品后需要设置一针Wash。其流动相设置分两段：甲醇：水（1+9），0.8mL/min，走40min；甲醇（100%），0.8mL/min，接着走40min。 感觉这个洗针流动相的梯度过渡似乎有些过于剧烈，想问问高手有没有必要多设置一些梯度，如3+7，7+3，再到100%甲醇逐渐过渡来保护柱子，理由是什么？大家平时又是怎么设置最后一针Wash的参数呢？ |
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中药2000
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
jiangchunyong(金币+3, EPI+1): 谢谢！ 2011-04-11 16:49:54
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jiangchunyong(金币+3, EPI+1): 谢谢！ 2011-04-11 16:49:54
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第一.建议你一般用1.0ml/min的流速洗柱子，洗柱子一般通过柱子的流动相是柱体积的数倍就行，1.0的流速节省时间，0.8ml/min的流速很浪费时间，除非柱子很脏或者进气泡了才用低流速冲洗柱子； 第二.工程师的设置没有问题，可以那么做。但为了柱子洗得更彻底，把不同极性的物质都从柱子里洗脱出来，建议你采用下面的梯度洗脱： 1.10%-90%（甲醇-水）30min(如果流动相为酸和碱必须从此开始洗脱) 2.30%-70%（甲醇-水）30min 3.50%-50%（甲醇-水）30min 4.70%-30%（甲醇-水）30min 5.100%（甲醇）30min以上 第三.如果时间允许，可以把乙腈也用上再洗脱一次。 如果柱子很脏，可以采用异丙醇低流速洗脱几次。 第四.以上洗脱程序适用于最常用的反相柱子。 第五.为了延长灯的使用寿命，洗柱子时建议关灯。 [ Last edited by 中药2000 on 2011-4-11 at 15:22 ] |
2楼2011-04-11 15:17:12
3楼2011-04-11 15:41:21
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至尊木虫 (文坛精英)
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