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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】液相问题，大家平时又是怎么设置最后一针Wash的参数呢？
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yangxicshe

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助】液相问题，大家平时又是怎么设置最后一针Wash的参数呢？ 已有3人参与

大家在走完HPLC样品后是怎么设置洗针的，道理是什么？

最近实验室进了一台日立HPLC仪，听装机器的工程师说，每次走完样品后需要设置一针Wash。其流动相设置分两段：甲醇：水（1+9），0.8mL/min，走40min；甲醇（100%），0.8mL/min，接着走40min。

感觉这个洗针流动相的梯度过渡似乎有些过于剧烈，想问问高手有没有必要多设置一些梯度，如3+7，7+3，再到100%甲醇逐渐过渡来保护柱子，理由是什么？大家平时又是怎么设置最后一针Wash的参数呢？
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1楼 2011-04-11 14:41:14
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maoyz0127

金虫 (正式写手)
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢！ 2011-04-11 16:50:13
走完样品后用甲醇：水（1：9）冲洗是为了把流动相中的缓冲盐洗掉，防止盐析出或长久存在于柱中造成堵塞柱子。我们一般是甲醇：水（1：9）冲洗40min,1.0ml/min,然后纯甲醇冲半小时。甲醇：水（1：9）冲洗时流速小点好，有助于将盐洗出，不过相应冲洗时间要延长。
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3楼2011-04-11 15:41:21
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中药2000

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主
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jiangchunyong(金币+3, EPI+1): 谢谢！ 2011-04-11 16:49:54
第一.建议你一般用1.0ml/min的流速洗柱子，洗柱子一般通过柱子的流动相是柱体积的数倍就行，1.0的流速节省时间，0.8ml/min的流速很浪费时间，除非柱子很脏或者进气泡了才用低流速冲洗柱子；

第二.工程师的设置没有问题，可以那么做。但为了柱子洗得更彻底，把不同极性的物质都从柱子里洗脱出来，建议你采用下面的梯度洗脱：
1.10%-90%（甲醇-水）30min(如果流动相为酸和碱必须从此开始洗脱)
2.30%-70%（甲醇-水）30min
3.50%-50%（甲醇-水）30min
4.70%-30%（甲醇-水）30min
5.100%（甲醇）30min以上

第三.如果时间允许，可以把乙腈也用上再洗脱一次。
      如果柱子很脏，可以采用异丙醇低流速洗脱几次。

第四.以上洗脱程序适用于最常用的反相柱子。

第五.为了延长灯的使用寿命，洗柱子时建议关灯。

[ Last edited by 中药2000 on 2011-4-11 at 15:22 ]
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2楼2011-04-11 15:17:12
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
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karl2100(金币+1): 多谢指教！ 2011-04-14 21:26:05
洗针的程序也不是固定不变的，按照自己的现实情况具体定。比如你的流动相就是水：甲醇=80:20你干嘛还非得按那个程序冲！直接用纯甲醇冲四五十分钟应该就可以了。
还有，比如我现在做的这个就是水相：甲醇=95：5，而且水相里还有浓度较高的离子对试剂，那我现在的冲洗方法是水：甲醇=95:5冲一个小时。再过渡成80%水然后是20%水，最后用纯甲醇。这个方法一共140min。
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学无止境
4楼2011-04-14 20:18:47
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