应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 检验 » 求救
41/1返回列表
查看: 590  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MedEPI ，点击这里进行查看

雨夜漫步

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2011-04-10 22:42:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

想做什么指标呢？

★ ★ ★ ★ ★
winzhouyun(金币+5, EPI+1): 谢谢参与 辛苦了！ 欢迎常来医学版 2011-04-12 13:16:30
最重要的要看你需要进行什么因子染色标记了，最重要的就是一抗，二抗还有DAB
在动物灌注固定切片染色过程中所需溶液：
4%多聚甲醛：A液：称取40g多聚甲醛干粉，加入400ml dd H2O中，滴加少许1mol/l NaOH溶液，密封置60℃水浴，使其完全溶解。B液：称取16.88g NaH2PO4•2H2O加入300ml dd H2O中，使其完全溶解。C液：称取3.86g NaOH加入200ml dd H2O中，使其完全溶解。将ABC液混匀，调节pH值为7.2-7.4，定容至1000ml。4℃储存备用，两周内使用。
磷酸盐缓冲液（PBS）：8g Nacl, 0.2g KCl, 1.56g Na2HPO4.H2O, 0.2gKH2PO4 溶解于 1L dd H2O 中。
70%、75%、80%、85%、90%、95%、梯度酒精溶液按照体积比用ddH2O稀释。
苏木素染液：将苏木素 2g溶于100ml无水酒精中，硫酸铝钾 15g溶于100ml蒸馏水中，与100ml甘油、10ml冰醋酸加在一起，充分搅拌均匀后，日晒四周，让其慢慢氧化成熟后方可使用。
伊红染液：水溶性伊红 2.5g 用蒸馏水(少许)调成浆糊状，加入70-75%酒精　　　　250ml边加边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸，加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色。
1%HCl酒精：向250ml 70%酒精中按（1:100）体积比加入2.5ml浓盐酸，混匀。
大概步骤：
动物麻醉后心脏灌注多聚甲醛固定，取肝脏后固定，石蜡包埋并切片或者冰冻切片。石蜡切片，片厚2μm。漂片水温50℃，烘片温度90℃。
石蜡切片脱蜡：
将石蜡切片装上片架，置60℃烘箱干烤1h至石蜡融化，趁热依次置于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、85%乙醇、80%乙醇、75%乙醇、70%乙醇、双蒸水中，每道5min。
抗原热修复（冰冻不需要）：
将脱水后的石蜡切片置于pH6.0的0.01M枸橼酸盐缓冲液槽中，水浴加热至100℃维持30min，待其自然冷却至室温。
免疫组织化学染色：
将经过抗原热修复的石蜡切片平铺在湿盒内，滴加甲醇稀释的3%过氧化氢溶液，室温放置30min灭活内源性过氧化物酶，PBS洗涤5min×3次，滴加3%BSA封闭非特异结合位点，室温放置30min，倒去多余BSA溶液，滴加以3%BSA溶液1:200稀释的第一抗体，4℃过夜，次日晨，取出，倒去多余抗体溶液，PBS洗涤5min×3次，滴加3%BSA溶液1:200稀释的第二抗体，37℃孵育1h，PBS洗涤5min×3次，滴加DAB显色剂，室温显色，随时观察，适时终止显色反应。每次实验均设置阳性对照及阴性对照组，阳性对照采用已知阳性切片，阴性对照采用PBS代替第一抗体。
苏木素复染细胞核：
将免疫组化染色完毕的切片置于苏木素染液中染色3-5min，立即取出，流水洗去多余苏木素染液，1%HCl酒精分化3s，置流水中蓝化45min。
脱水、透明、封片
将染色完毕的切片依次通过70%乙醇、75%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ梯度酒精脱水，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明，中性树胶封片。
如不明白，请短我。

[ Last edited by ujsyangyong on 2011-4-11 at 22:58 ]
赞一下(1人) 回复此楼
实验，实验，还是实验！
2楼2011-04-11 22:55:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨夜漫步

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-04-11 23:10:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 雨夜漫步 at 2011-04-11 23:10:59:
大虾，留一下联系方式，非常感谢！！

已短你
回复此楼
实验，实验，还是实验！
4楼2011-04-12 21:59:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雨夜漫步 的主题更新
41/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 函评 +3 布布和一二 2026-06-13 3/150 2026-06-13 23:35 by 芋圆香飘飘
[硕博家园] T^T +6 m584r2z4j3 2026-06-11 7/350 2026-06-13 23:10 by 3eaav2pea1
[找工作] 售SCI文章，我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 q1zg6x4lf3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 19:07 by 1js5n6upxm
[硕博家园] O(∩_∩)O +5 jk31rb6vyz 2026-06-12 7/350 2026-06-13 18:45 by lkmi35jdzt
[公派出国] π_π +4 m584r2z4j3 2026-06-11 4/200 2026-06-13 18:33 by lkmi35jdzt
[考研] T^T +6 m584r2z4j3 2026-06-11 6/300 2026-06-13 18:29 by lkmi35jdzt
[文学芳草园] 咸菜 +3 myrtle 2026-06-10 3/150 2026-06-13 18:29 by ahsoarli
[考博] π_π +4 m584r2z4j3 2026-06-11 4/200 2026-06-13 18:25 by lkmi35jdzt
[考研] o>_<o +5 m584r2z4j3 2026-06-11 5/250 2026-06-13 18:22 by lkmi35jdzt
[考博] T^T +3 q1zg6x4lf3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 14:45 by 80j16ujcu8
[考研] O(∩_∩)O +3 q1zg6x4lf3 2026-06-12 4/200 2026-06-13 14:42 by 80j16ujcu8
[考博] T^T +4 jk31rb6vyz 2026-06-12 4/200 2026-06-13 12:09 by 80j16ujcu8
[考博] →_→ +3 q1zg6x4lf3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 08:49 by t4hz8376wy
[找工作] *囍 +3 m584r2z4j3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 08:29 by t4hz8376wy
[论文投稿] →_→ +5 m584r2z4j3 2026-06-11 5/250 2026-06-13 08:13 by t4hz8376wy
[考博] [急招]吉林大学招收26年9月入学考核制博士生1名，截止今晚24点前 +3 hehejin 2026-06-10 4/200 2026-06-12 18:24 by 冻雨天
[教师之家] 重庆理工大学副校长遇刺身亡 传涉案副教授疑因积怨行凶 +6 yexuqing 2026-06-07 7/350 2026-06-12 16:46 by wwwkkk83
[基金申请] 前几天时间戳更新了 +8 vito刘 2026-06-11 13/650 2026-06-12 14:17 by BlakeReary
[教师之家] AASSDDFF +3 m584r2z4j3 2026-06-11 3/150 2026-06-12 11:28 by zs48m4lz8g
[考博] 还有课题组有博士名额吗 +5 冻雨天 2026-06-07 6/300 2026-06-08 20:59 by RCS_tyro
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭