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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 【讨论】MSC & DMEM
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liubin

专家顾问 (著名写手)

[交流] 【讨论】MSC & DMEM 已有9人参与

我最近培养MSC 老出问题
开始细胞都长得很好
大概在20天左右细胞就死了

我是不是没有选择正确的培养基？








[ Last edited by liubin on 2011-4-4 at 10:51 ]
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1楼 2011-04-04 09:35:42
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liubin

专家顾问 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by weige2009 at 2011-04-04 20:12:45:
我们用的就是DMEM，加了细胞因子，F12.

请你帮忙看看你用的DMEM 的成分是否和我用的一样？

谢谢！
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3楼2011-04-04 20:59:46
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liubin

专家顾问 (著名写手)
★
taozhikai(金币+1): 谢谢 2011-04-04 21:30:08
引用回帖:
Originally posted by weige2009 at 2011-04-04 21:18:10:
我们用的是gibico的粉末的，用的时候自己配置就好了。

麻烦你去查一下包装上的成分好不？
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5楼2011-04-04 21:20:07
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liubin

专家顾问 (著名写手)
★
taozhikai(金币+1): 谢谢 2011-04-05 09:31:32
引用回帖:
Originally posted by weige2009 at 2011-04-05 08:52:05:
gibco：high glucose；with L-glutamine；with pyridoxine hydrochloride；without sodium pyruvate；without sodium bicarbonate。具体什么成分没写。我们培养的是人羊膜间充质干细胞，刚开始就用DMEM，长的不好 ...

谢谢

看得出来我用的 DMEM与你用的略有不同
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7楼2011-04-05 09:15:35
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liubin

专家顾问 (著名写手)
★
taozhikai(金币+1): 谢谢 2011-05-10 09:00:11
引用回帖:
Originally posted by pengkai at 2011-05-08 17:33:28:
楼主后来长得怎么样？我最近也想培养SD大鼠得BMS。希望能提供一些经验。另外如果您有相关的英文文献，可否把题目发上来，共同学习一下。

经确认是血清的问题（奸商导致的）
我更换了血清
MSC目前长的很好
上周传了1代
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11楼2011-05-09 08:53:24
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liubin

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Originally posted by dhd997 at 2011-04-11 14:15:39:
如果是正常细胞，是不能无限增殖的。开始很好，马上保种，有些细胞就是越传越退

你说的很对头。
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12楼2011-05-09 08:55:31
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liubin

专家顾问 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by baitao8888 at 2011-05-08 19:54:58:
你们加双抗了吗？

加双抗了。
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13楼2011-05-09 08:56:46
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liubin

专家顾问 (著名写手)
★
taozhikai(金币+1): 谢谢 2011-05-11 23:31:35
引用回帖:
Originally posted by pengkai at 2011-05-09 16:33:29:
用的也是胎牛血清吗？
从去间充质干细胞开始到现在传了一代MSC大约用多少时间？
谢谢您的回复。

大概30天，细胞就长满了。
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15楼2011-05-09 18:02:08
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liubin

专家顾问 (著名写手)
★ ★
taozhikai(金币+2): 谢谢您的热心 2011-05-11 23:31:14
引用回帖:
Originally posted by pengkai at 2011-05-11 21:42:01:
今天用密度离心分离SD大鼠的MSC，可是不知道离心转数怎么选。看了别人的，有的2500r的，我先用2200的离，不过效果不理想，后来用2500r的离，结果实验就失败了。楼主在这方面应该很有经验，可否提供一些建议？

...

密度梯度·离心·没有实质意义。

一般来讲，离心后不外乎依次分为以下几层·
血清·
白色·膜状·层·
红细胞·

中间这层是什么·呢·？

白细胞·居多·，吸的时候不可避免·要·带上·一下红细胞·

这里面的所谓干细胞中的一些已经确定了朝血细胞分化的方向

所以在培养中仍然会出现红细胞和白细胞


结论：
密度梯度离心没有实际意义

建议：
直接接种全骨髓
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18楼2011-05-11 23:02:16
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liubin

专家顾问 (著名写手)
★
taozhikai(金币+1): 谢谢哦 2011-05-11 23:30:54
引用回帖:
Originally posted by pengkai at 2011-05-11 23:09:26:
我的理解就是全血培养，在体外再诱导了呗。

每换液一次血细胞会越来越少

就是纤维蛋白老粘附着死亡的红细胞
看起来不干净

当细胞局部长满，大概21天
先倒掉培养基，用2ml胰酶漂洗2-5min，倒掉后再加培养基
看起来就干净了许多
MSC还铁壁的很好
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20楼2011-05-11 23:19:28
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