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xiaotan1952

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【原创】关于P65检测的问题,欢迎大家指教、讨论 已有2人参与

本人正在做某一目的基因与其下游NF-KB活性的实验(非刺激状态下)

该目的基因可能参与了ikb-a的降解,即预期的实验效果为沉默该基因后包浆ikb-a含量(WB)上调,p65核内转位减少(WB),DNA结合能力下调(EMSA)

目前我所考虑的ikb-a的WB即用总蛋白(或提包浆蛋白)

但是关于p65我有些疑问,到底仅只需提取核内蛋白做p65的WB(普通p65抗体)即能反映p65核内转位表达的变化,还是需要加做总蛋白p65(即核内p65/总p65的比值)来反映p65核内转位表达的变化呢?

思考这个问题已经不短时间了,在各大园子里也关注过大家的讨论,也看了一点点文献,但是一直没有明确这样一个问题

特请各位指教、讨论,谢谢!
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maggiell

新虫 (初入文坛)

定点突变酶切之后出问题,请教高手~~~~!!!

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): 欢迎交流 2011-04-07 11:27:27
我刚开始做定点突变,在PCR扩增之后出来的电泳条带是正确的,4000多bp,但是用 DpnI酶切之后的到得电泳条带就出问题了,居然跑到1000bp多去了。问了师姐,他说的得到的条带应该跟原来的差不多才对,我重复做了两三次,得到的结果都是一样的。其中有一次还做了个对照组,很奇怪,在酶切之后对照组中的模板条练居然也还能跑出来(按理说,对照组应该不出线条带才对呀。),结果跟上面说的差不多,,都是在1000多。我实在不明白啊,请前辈们帮我解解疑惑吧!!!
3楼2011-04-07 09:53:46
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xiaotan1952

铁虫 (初入文坛)

自己顶起

自己顶起,还望熟悉的XDJM们一起来讨论、指教
2楼2011-04-04 22:59:54
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