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xiaotan1952

铁虫 (初入文坛)

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专业: 消化系统肿瘤

[交流] 【原创】关于P65检测的问题，欢迎大家指教、讨论已有2人参与

本人正在做某一目的基因与其下游NF-KB活性的实验（非刺激状态下）

该目的基因可能参与了ikb-a的降解，即预期的实验效果为沉默该基因后包浆ikb-a含量（WB）上调，p65核内转位减少（WB），DNA结合能力下调（EMSA)

目前我所考虑的ikb-a的WB即用总蛋白（或提包浆蛋白）

但是关于p65我有些疑问，到底仅只需提取核内蛋白做p65的WB（普通p65抗体）即能反映p65核内转位表达的变化，还是需要加做总蛋白p65（即核内p65/总p65的比值）来反映p65核内转位表达的变化呢？

思考这个问题已经不短时间了，在各大园子里也关注过大家的讨论，也看了一点点文献，但是一直没有明确这样一个问题

特请各位指教、讨论，谢谢！

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1楼 2011-04-03 14:48:01

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maggiell

新虫 (初入文坛)

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定点突变酶切之后出问题，请教高手~~~~！！！

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): 欢迎交流 2011-04-07 11:27:27

我刚开始做定点突变，在PCR扩增之后出来的电泳条带是正确的，4000多bp，但是用 DpnI酶切之后的到得电泳条带就出问题了，居然跑到1000bp多去了。问了师姐，他说的得到的条带应该跟原来的差不多才对，我重复做了两三次，得到的结果都是一样的。其中有一次还做了个对照组，很奇怪，在酶切之后对照组中的模板条练居然也还能跑出来（按理说，对照组应该不出线条带才对呀。），结果跟上面说的差不多，，都是在1000多。我实在不明白啊，请前辈们帮我解解疑惑吧！！！