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落雪含香

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】HPLC基线漂移问题已有9人参与

我的HPLC的流动相是 A：含TFA0.01%的水 B：含TFA0.01%的乙腈用5%~95%的B梯度洗脱，测定波长为220，柱子平衡了一个多小时，但是还是基线漂移，就连进样量为零的时候，都漂移，空白溶剂也漂移，样品也漂移，但是可以看到样品比空白溶剂多一个小小峰，这是怎么回事？我还能继续做吗？如何解决呢？

谢谢大家的回复，我后来把检测波长换成270nm了，基线虽然还是有些漂移，但已经好多了，样品的峰也明显了，我想应该还是梯度洗脱与检测波长的原因，机器还是一年前买的，不会是机器故障，流动相都是用的HPLC级别的，并过滤除气，流动相的影响不大。TFA我是必须加入到流动相中，用于保护我的样品，因为样品里面有多肽。

谢谢大家的热心回复

[ Last edited by 落雪含香 on 2011-4-6 at 11:23 ]

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1楼2011-03-29 20:48:51

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zhengyi

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

Originally posted by novus at 2011-04-02 20:20:13:
由于TFA本身是有紫外吸收，往往在水和乙腈溶液中的紫外吸收也是不一样的（在220nm时TFA-乙腈高于TFA-水，210nm正好相反），所以你会发现你的基线是会随着乙腈的比例增加而一直往上飘直到95%保持不变，这个是正常现 ...

是的，估计是TFA造成的