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落雪含香

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】HPLC基线漂移问题 已有9人参与

我的HPLC的流动相是  A:含TFA0.01%的水  B:含TFA0.01%的乙腈     用5%~95%的B梯度洗脱,测定波长为220,柱子平衡了一个多小时,但是还是基线漂移,就连进样量为零的时候,都漂移,空白溶剂也漂移,样品也漂移,但是可以看到样品比空白溶剂多一个小小峰,这是怎么回事?我还能继续做吗?如何解决呢?


谢谢大家的回复,我后来把检测波长换成270nm了,基线虽然还是有些漂移,但已经好多了,样品的峰也明显了,我想应该还是梯度洗脱与检测波长的原因,机器还是一年前买的,不会是机器故障,流动相都是用的HPLC级别的,并过滤除气,流动相的影响不大。TFA我是必须加入到流动相中,用于保护我的样品,因为样品里面有多肽。


谢谢大家的热心回复

[ Last edited by 落雪含香 on 2011-4-6 at 11:23 ]
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zhengyi

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by novus at 2011-04-02 20:20:13:
由于TFA本身是有紫外吸收,往往在水和乙腈溶液中的紫外吸收也是不一样的(在220nm时TFA-乙腈高于TFA-水,210nm正好相反),所以你会发现你的基线是会随着乙腈的比例增加而一直往上飘直到95%保持不变,这个是正常现 ...

是的,估计是TFA造成的
宠辱不惊看庭前花开花落去留无意望天空云卷云舒
12楼2011-04-06 09:20:51
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
jiangchunyong(金币+2): 谢谢! 2011-03-29 21:45:45
不能继续做。先解决漂移的问题再做。
1、流动相原因。
2、管路污染。
3、检测池污染或有气泡。
4、氘灯寿命已尽。
5、电源电压不稳。
6、检测器电路板故障。
守候在风中的宁静。
2楼2011-03-29 20:52:59
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宥野

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
中药2000(金币+1): 热心助人。 2011-04-02 20:32:07
一般走梯度,或多或少都会飘,只要飘的不是太高就行。你所说的多一小杂质,可能是你的进样阀或进样针没洗干净,或是你的溶剂交叉污染等原因。
3楼2011-03-30 18:09:54
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
中药2000(金币+1): 热心助人。 2011-04-02 20:32:38
你的检测波长挺低的,梯度基线飘很普遍,在可接受的范围就行。挂上张图看看
学无止境
4楼2011-03-30 19:24:10
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