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张丽慧818

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】溶酶体如何溶解啊？之后要进行硫酸铵分级

大家好，我现在是用密度梯度离心得到了溶酶体部分，可是这部分是沉淀物质，然后我用缓冲液吹打开，之后进行硫酸铵分级。硫酸铵分级沉淀要求澄清溶液，我就（1）将溶酶体在600g离心10分钟，可是这样的话就会损失一部分，因为会沉下来一部分有活性的。
（2）将溶酶体在10000g离心10分钟，可是这样的话损失更多了。

能否不离心直接上层析柱啊？这个吹打开的溶液是肯定不能上柱还是上柱会产生什么影响呢？

（3）我采用的是在600g先离心，之后上清进行硫酸铵沉淀，加入l硫酸铵达到20%的饱和度，振荡1.5小时，接着离心，不管是在600g离，还是在10000g离都会产生带活性的沉淀，可是根据文献记载是用35%和 40%，我用的饱和度20%，应该是没有活性沉淀的。
这到底是什么原因啊？我事先都拿600g离心了，沉淀之后再用600g离怎么还有沉淀啊？
（4）我加硫酸铵达到75%的饱和度，在10000g下也沉不下来。是因为我振荡时间少吗？我振了1个小时。我在60%时振了1.5小时，能沉下来。这种现象还有什么原因啊？

四个问题一直很困惑，希望大家帮我解惑一下。

或者提出什么建议性的试验步骤。怎么将沉淀性的溶酶体用于后续步骤层析柱。（我要的是溶酶体中的酶，需要低温）

谢谢大家，希望大家多给些建议

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