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| 果胶脂酶和果胶裂解酶的酶活如何让测定，方法和原理是什么？哪位大师给我讲讲，先大谢啦 |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2): guood 2011-03-27 09:16:07
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网上找的，分享给你 实验三 蕃茄中果胶酶活力的测定 一、原理： 蕃茄中的果胶酶系相当复杂，它主要包括聚半乳糖醛酸酶（PG）和果胶脂酶（PE）两类。聚半乳糖醛酸酶能催化果胶降解，导致果胶溶液粘度下降。因此，通过测定酶催化反应体系粘度下降的速度能测定它的活力，果胶脂酶能催化果胶分子中半乳糖醛酸单位上的酯键水解产生游离的羧基和甲醇，导致果胶溶液的pH下降，因此可以用pH—stat方法测定它的活力。 二、试剂： 1． 20%氯化钠溶液 2．0.05mol/L的醋酸—醋酸钠缓冲溶液pH4.5（Ⅰ） 3.1%果胶溶液pH 4.5 4. 0.5mol/L的醋酸—醋酸钠缓冲溶液pH4.5（Ⅱ） 5．1mol/L氯化钠溶液 6．0.1mol/L氢氧化钠溶液（准确标定） 7．0.05mol/L 氢氧化钠溶液 三、步骤： 1．酶液的制备 300g蕃茄+100mL20%氯化钠溶液→均浆→离心（3000rpm 15min）→上层清液→抽滤→离心〔80%（NH4）2SO4饱和度〕→沉淀（溶于0.05mol/L醋酸——醋酸钠缓冲液<10mL）→酶液在0.05mol/L醋酸——醋酸钠缓冲液中透析→透析物→离心→部分纯化的果胶酶溶液 2．PG活力测定 50ml1%果胶+20ml0.5mol/L醋酸——醋酸钠缓冲液+30ml去离子水 ↓ 混匀于250ml具塞三角瓶，搅拌15min ↓ 转移20ml于50ml三角瓶中 部分纯化酶液 ↘ ↓ ↙ 粘度计 ↙ 30度恒温水浴平衡↘ 吸1ml去离子水于果胶溶液中 吸1ml酶液于果胶溶液中，计时 ↓ 10ml反应液于恒温好的粘度中 ↙ ↘ 果胶空白实验 在不同时间间隔连续 记录体系流动时间测3次 测定体系流动间 注：以流动时间对测定时间作图，并外推求出零点。从直线的斜率计算流动时间降低的速度，以每秒流动时间降低的百分数表示果胶酶的活力。 3．PE活力测定。 10ml1%果胶+2 .5ml1M的NaCl+10ml去离子水（于50ml酶反应器中，恒温30℃） ↓ 0.1MNaOH调PH7.5 ↓ 加5ml酶液（pH7.5），立即用0.1MNaOH调PH7.5，计时 ↓ 0.05MNaOH调PH7.3——7.8 ↓ 测定不同时间碱液消耗量（累积量）。30 ℃，40 ℃各做一次。 注：作NaOH消耗量——反应时间图，从直线斜率计算酶的活力。每分钟释放出一个微克当量羟基定义为一个果胶酯酶的活力单位。 |
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starseacow
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